簡(jiǎn)介
活性氧（ROS）是含氧的化學(xué)反應(yīng)性分子（如超氧化物，羥基，單線態(tài)氧和過(guò)氧化物）。由于存在不成對(duì)的價(jià)電子電子，ROS具有高反應(yīng)性。 ROS形成氧的正常代謝的天然副產(chǎn)物，并且在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和體內(nèi)平衡中具有重要作用。然而，在環(huán)境壓力（例如，UV或熱暴露）期間，ROS水平可顯著增加。 這可能導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)的顯著損害。累積地，這被稱為氧化應(yīng)激。 ROS也由外源性源如電離輻射產(chǎn)生。在氧化應(yīng)激條件下，ROS產(chǎn)生顯著增加，導(dǎo)致膜脂，蛋白質(zhì)和核酸的后續(xù)改變。這些生物分子的氧化損傷與衰老以及各種病理事件有關(guān)，包括動(dòng)脈粥樣硬化，癌變，缺血再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病。
細(xì)胞滲透性ROS Brite TM APF和HPF試劑是非熒光的并且在與羥基自由基或過(guò)氧亞**根陰離子反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生亮綠色熒光（激發(fā)/發(fā)射= 490 / 515nm），APF也將與次**根陰離子（OCl）反應(yīng)。此外，APF和HPF在過(guò)氧化物酶存在下也與過(guò)氧化氫反應(yīng)。 可以使用熒光成像，高內(nèi)容成像，微孔板熒光測(cè)定法或流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量所得熒光。 APF和HPF顯示出對(duì)光誘導(dǎo)氧化的相對(duì)高的抗性。 APF和HPF在與羥基或過(guò)氧亞**根陰離子反應(yīng)之前是非熒光的。
物理化學(xué)特性
ROS Brite?染料的分析方案
該步驟僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。在制備ROS Brite?工作溶液之前，根據(jù)需要處理細(xì)胞。
1）在DMSO中制備10至20mM ROS Brite TM APF（或HPF）儲(chǔ)備溶液。通過(guò)將DMSO儲(chǔ)備溶液稀釋到含有20mM Hepes緩沖液（HHBS）的Hanks溶液中，制備1至10μM的工作溶液。
2）根據(jù)需要處理細(xì)胞（例如，用50-100nM血管緊張素II處理RASM細(xì)胞3-5小時(shí)）
3）用ROS Brite?APF（或HPF）（1-10μM，步驟＃1）在37℃孵育細(xì)胞20-60分鐘。
4）用HHBS緩沖液替換染料加載溶液。
5）用適當(dāng)?shù)臒晒鈨x器在Ex / Em = 490 / 525mm（截止= 515nM）下用底部讀取模式分析細(xì)胞（例如，用于熒光顯微鏡的FITC濾光器，用于流式細(xì)胞儀的FL1濾光器）。
注意：BSA和酚紅會(huì)影響熒光，應(yīng)謹(jǐn)慎使用。 APF和HPF均可用于溶液測(cè)定或細(xì)胞內(nèi)測(cè)量。
參考文獻(xiàn)
1. Du M, Zhang D, Yan C, Zhang X. (2012) Developmental toxicity evaluation of three hexabromocyclododecane diastereoisomers on zebrafish embryos. Aquat Toxicol, 112-113, 1.
2. Park WH. (2012) MAPK inhibitors and siRNAs differentially affect cell death and ROS levels in arsenic trioxide-treated human pulmonary fibroblast cells. Oncol Rep, 27, 1611.
3. Park WH, Kim SH. (2012) MG132, a proteasome inhibitor, induces human pulmonary fibroblast cell death via increasing ROS levels and GSH depletion. Oncol Rep, 27, 1284.
4. Wu YT, Lin CY, Tsai MY, Chen YH, Lu YF, Huang CJ, Cheng CM, Hwang SP. (2011) beta-Lapachone induces heart morphogenetic and functional defects by promoting the death of erythrocytes and the endocardium in zebrafish embryos. J Biomed Sci, 18, 70.
5. You BR, Kim SZ, Kim SH, Park WH. (2011) Gallic acid-induced lung cancer cell death is accompanied by ROS increase and glutathione depletion. Mol Cell Biochem, 357, 295.