>>遇到支原體污染，如何挽救您無比珍貴的細胞？

?

------支原體檢測、預防、去除一步到位！

?

>>>導讀

實驗室和細胞工廠在細胞培養過程中，一直受到支原體污染的困擾，翌圣生物（YEASEN）的細胞房曾經也受到過支原體的污染，我們選擇過很多進口品牌的清除劑對支原體進行滅殺，這些品牌很難做到整體清除。針對這個問題，經過我們多次的實驗驗證，推出了整體清除支原體的方案。我們的產品有：支原體檢測、培養體系中支原體的清除、環境中支原體的清除（培養箱、水浴鍋、超凈臺和細胞房）、支原體預防相關。

?

>>>背景介紹

支原體污染對細胞培養造成多方面的不良影響，已經成為在細胞培養時的一個嚴重問題，保守估計常規細胞培養中支原體污染率為15-35%，嚴重干擾實驗結果的可信度。因此，定期進行支原體檢測和去除，確保無支原體存在細胞培養體系內才能獲得準確有效的實驗數據。

?

什么是支原體（Mycoplasma）

????支原體又稱霉形體，直徑在0.1-0.3μm，是目前發現的最小的、最簡單的原核生物，可以輕松地通過濾膜，混入培養系統中，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態。通常依附在細胞膜表面，支原體沒有剛性的細胞壁，因此普通的抗生素對它根本不起作用，實驗室常見的種類有：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。

?

?

圖1：支原體的形態及特點

?

支原體污染的后果

細菌和真菌造成的污染相對比較容易檢測、預防和去除，然而支原體造成的污染很難察覺，即使生長密度高達 107-109 CFU/mL，也很難有污染跡象（渾濁、pH 變化等）。支原體污染后會導致細胞生長變慢，狀態變差，不會馬上使細胞致死，但會影響細胞內的各種參數，如改變細胞膜抗原性，改變細胞新陳代謝，干擾核酸的合成，改變 DNA 轉染效率，導致染色體畸變等。

?

圖2：受支原體污染后細胞出現的相關狀態的改變

?

典型的支原體污染來源

①細胞之間交叉染；? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?

②工作環境或實驗器材的污染；? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
③實驗者無菌操作不佳；
④培養基或其他試劑污染；

⑤制備細胞的原始組織或器官的污染；

細胞培養遇到支原體污染，怎么辦

?

圖3：支原體污染整體解決方案

>>>Yeasen三位一體幫您解決細胞支原體污染問題

一、支原體檢測

?

一步法恒溫支原體檢測：

Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑采用獨有的等溫擴增技術，在顏色判別方面具有更強的辨識度，由紫紅色（陰性）向天藍色（陽性）的變化，更利于肉眼的判別。

?

圖4：一步法支原體檢測操作流程

PCR法支原體檢測：

Yeasen PCR支原體檢測法不同于普通的一步法PCR檢測方法，將原先的1對引物提高至3對引物，針對支原體16s和23s保守區進行巢式PCR擴增，在改變產品非特異性的同時大大提升了產品的靈敏度，可以檢測低至單個拷貝的支原體。

?

?圖5: PCR法擴增含不同濃度支原體樣品獲得的凝膠電泳圖

?

表1：Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑所能檢測的支原體種類

?

【注】藍色部分為一步法恒溫檢測和PCR法支原體檢測所能檢測的相同支原體

?

二、MycAwayTM?支原體去除試劑（1000×）

MycAway^TM?支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過抑制 DNA 和支原體生長所必須的相關蛋白合成來取得良好的支原體清除效果且對細胞無傷害，最大程度上挽救您的細胞，減少因支原體污染帶來的損失。

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??圖6：細胞去除效果的展示

支原體去除試劑的特點：

毒性低：對細胞毒性小，不影響后續細胞實驗，如細胞活力檢測和細胞轉染等；

穩定性強：-20℃試劑能較長時間保存并保持高效作用；

操作簡單：只需將產品添加至支原體污染的培養基中孵育即可；

起效快：“立竿見影”、最快3天即可見效；

去除范圍廣：能去除實驗室絕大多數支原體類型。

?

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?????????????圖7：支原體去除試劑細胞毒性檢測圖示

三、支原體預防

?

?

>>>FAQ

Q:如何檢測新鮮的培養基是否有支原體污染？

A:把新鮮的培養基放在CO₂培養箱中培養48小時（樣品），吸取一定的上清進行檢測。如果樣品的顏色變成天藍色或者出現PCR擴增條帶，則證明含有支原體污染。

Q:對于同一個樣品，為什么一步法恒溫試劑盒檢測結果為陽性，而PCR檢測為陰性呢？

A:一步法恒溫檢測試劑盒檢測的支原體的種類是27種，而PCR檢測方法檢測的是常見的13種支原體。樣品中污染的支原體可能不包括在PCR法檢測的支原體種類內。

Q:對于同一個樣品，為什么PCR結果為陽性，而一步法恒溫檢測試劑盒結果為陰性？

A:PCR方法的靈敏度要高于一步法恒溫檢測法，可以檢測單個拷貝的支原體，而一步法需要103個拷貝的支原體數目。

Q:巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測試劑盒到底哪個比較好呢？

A:客戶可以根據自己的實驗需求選擇相應的產品，也可以聯合使用兩者對支原體進行鑒定。

?訂購信息