逆轉錄酶（Reverse Transcriptase，簡稱RT酶）是一種能夠將RNA模板轉化為互補DNA（cDNA）的酶。在分子生物學研究中，逆轉錄酶的應用極為廣泛，特別是在分子診斷領域發揮著不可或缺的作用。通過逆轉錄過程，可以將病毒的RNA基因組轉換為cDNA，之后便可以利用如qPCR等技術對其進行擴增和檢測。這一特性使得對諸如艾滋病、甲型流感以及乙型流感這類RNA病毒進行準確診斷成為可能。
追求更快速、更靈敏且操作更為簡便的RT-qPCR分子診斷試劑已成為當前的主要發展趨勢。作為RT-qPCR過程中的關鍵原料之一，逆轉錄酶需要具備更快的逆轉錄速度、更高的合成產量以及更好的耐熱性能。為了獲得更適用于RT-qPCR的逆轉錄酶，翌圣生物在M-MLV的基礎上通過基因改造，開發出RNase H活性更低，熱穩定性更高，持續合成能力更強的Hifair® 系列逆轉錄酶。
翌圣Hifair®系列逆轉錄酶
目前翌圣有多種Hifair®系列逆轉錄酶，并且可提供各種劑型的產品，包含單酶、預混液，您可以根據實際需求進行選擇。下表羅列了翌圣不同逆轉錄酶的特點和推薦應用。
表1.翌圣逆轉錄酶選擇指南
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產品名稱（貨號） |
產品特點 |
推薦應用 |
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Hifair® III逆轉錄酶（11111ES） |
熱穩定（高達65℃），適合復雜模板 |
RT-LAMP |
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Hifair® V逆轉錄酶（11300ES） |
兼容性強，速度快、合成產量高 |
一步法RT-PCR/qPCR |
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Hifair® Ultra逆轉錄酶（14604ES） |
持續合成能力強，合成長度可達20 kb |
RT-PCR/qPCR、RNA-seq、單細胞測序 |
注：以上所有的酶都有高濃度或無甘油版形式
下面重點介紹一款應用在RT-qPCR分子診斷試劑的逆轉錄酶：Hifair® V Reverse Transcriptase。該酶兼容性強，速度快、合成產量高，可耐受高達58℃的反應溫度，非常適合用于RT-qPCR分子診斷試劑的開發。
Hifair® V逆轉錄酶性能展示
01
可耐受58℃反應溫度，適合復雜RNA模板的逆轉錄
圖3.將Hifair® V Reverse Transcriptase及進口品牌T*的逆轉錄酶分別在55℃及58℃下孵育30min檢測殘余酶活。結果顯示Hifair® V Reverse Transcriptase在58℃下孵育30min仍能保持70%活性，遠超進口品牌。
02
應用于RT-qPCR檢出率優于其他品牌，檢出范圍：1 pg-1 μg
圖4.以1 pg-1 μg（7個梯度）的293T細胞總RNA為模板，使用Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR(Cat#11142)、V*、T*進行逆轉錄，得到的cDNA進行qPCR定量分析。結果顯示，11142ES靈敏度可達1 pg，檢出率優于競品。
翌圣逆轉錄酶突變體庫
翌圣生物利用其ZymeEditor™雙向分子酶理性設計與定向進化平臺，持續推進逆轉錄酶的進化研究。至今，我們已經篩選出多種在不同應用場景下表現卓越的逆轉錄酶突變體，能夠全面滿足不同客戶群體在多樣化應用領域的需求。
表2.翌圣逆轉錄酶突變體選擇指南
相關產品推薦
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產品類型 |
產品名稱 |
貨號 |
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高性能PCR單酶系列 |
10726ES |
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11300ES |
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10303ES |
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10603ES |
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10125ES |
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超潔凈PCR單酶系列，超低宿主殘留 |
Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
14314ES |
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Hifair UCF.ME® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)
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14608ES |
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UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL |
14466ES |
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14672ES |
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可凍干PCR單酶系列 |
Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (5U/μL) |
14316ES |
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11301ES |
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Uracil DNA Glycosylase(UDG),Heat-Labile(1 U/μL,Glycerol-Free) |
10707ES |
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10703ES |