殺稻瘟菌素S的作用原理

殺稻瘟菌素S（Blasticidin S）是一種從灰色鏈霉菌（Streptomyces griseochromogenes）中提取的核苷類抗生素，主要通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核細胞的蛋白質合成。其具體作用機制包括阻斷釋放因子誘導的肽基-tRNA水解，并增強tRNA與核糖體大亞基的結合，從而在一定程度上抑制肽鍵的形成。

殺稻瘟菌素S具有快速而強效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導致細胞迅速死亡。它不僅對細菌和真核生物中的蛋白質合成有顯著抑制作用，還對真菌、線蟲和腫瘤細胞也具有活性。殺稻瘟菌素S常用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉染細胞。

殺稻瘟菌素S的應用

01細胞培養與篩選

哺乳動物細胞：殺稻瘟菌素S常用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉染細胞。這些抗性基因分別來自蠟樣芽孢桿菌和土曲霉，能夠將殺稻瘟菌素轉化為無毒的衍生物，從而實現對未攜帶抗性基因細胞的選擇性殺死，哺乳動物細胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/mL。

細菌選擇：在細菌培養中，推薦使用濃度為25-100 µg/mL，可以迅速導致未攜帶抗性基因的細胞死亡。

E. coli對Blasticidin S的敏感性稍差，但是轉化子對Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養基（pH 8）進行篩選，濃度范圍為50-100 μg/mL Blasticidin S，高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

植物細胞：同樣適用于植物細胞的基因轉移實驗，常用bsr和BSD作為篩選標志。

02研究蛋白質合成

殺稻瘟菌素S被用于研究肽鍵形成水平上的蛋白質合成過程，特別是在TLR-2構建體的HEK293-T細胞和HEK-D5細胞中的應用。

03抗真菌特性

它還具有一定的抗真菌活性，可用于預防和治療稻瘟病。其殺菌作用主要是影響蛋白質的合成，并且能夠抑制孢子萌發、菌絲發育和孢子形成。

04其他應用

殺稻瘟菌素S也被用于研究腫瘤細胞的抑制效果。
它還可以作為含有抗性基因bls、bsr或BSD的轉化細胞的選擇劑。

稻瘟菌素S的相關實驗步驟（哺乳動物穩轉株篩選）

1）Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/mL。攜帶bsr或BSD基因的質粒轉染到細胞中，在含有Blasticidin S的正常生長培養基中孵育，用于篩選穩定轉染細胞株。

2）轉染后48 h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養基將細胞傳代（注：細胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細胞密度太高，抗生素效率降低。細胞分盤時覆蓋率最好不超過25%）。

3）每3-4天去除培養基，加入含抗生素的新鮮培養基。

4）7天后檢測細胞集落形成。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率，集落形成可能需要增加一周或更久。

5）轉移5-10個耐受克隆到35 mm細胞盤中，加入選擇培養基維持培養7天。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。 

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