殺稻瘟菌素S的作用原理
殺稻瘟菌素S（Blasticidin S）是一種從灰色鏈霉菌（Streptomyces griseochromogenes）中提取的核苷類抗生素，主要通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成。其具體作用機(jī)制包括阻斷釋放因子誘導(dǎo)的肽基-tRNA水解，并增強(qiáng)tRNA與核糖體大亞基的結(jié)合，從而在一定程度上抑制肽鍵的形成。
殺稻瘟菌素S具有快速而強(qiáng)效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。它不僅對細(xì)菌和真核生物中的蛋白質(zhì)合成有顯著抑制作用，還對真菌、線蟲和腫瘤細(xì)胞也具有活性。殺稻瘟菌素S常用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
殺稻瘟菌素S的應(yīng)用
01細(xì)胞培養(yǎng)與篩選
哺乳動物細(xì)胞：殺稻瘟菌素S常用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。這些抗性基因分別來自蠟樣芽孢桿菌和土曲霉，能夠?qū)⒌疚辆剞D(zhuǎn)化為無毒的衍生物，從而實現(xiàn)對未攜帶抗性基因細(xì)胞的選擇性殺死，哺乳動物細(xì)胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/mL。
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細(xì)胞 |
種屬 |
組織 |
培養(yǎng)基 |
Blasticidin S濃度 (μg/mL) |
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HeLa 人類子宮細(xì)胞 |
Human |
Uterus |
DMEM |
3-10 |
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HEK293 人類胚胎腎細(xì)胞 |
Human |
Kidney |
DMEM |
3-10 |
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B16 小鼠黑色素瘤細(xì)胞 |
Mouse |
Melanoma |
RPMI |
3-10 |
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PC1.0 敘利亞倉鼠腺癌細(xì)胞 |
Hamster |
Adenocarcinoma |
RPMI |
10-30 |
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CHO 中國倉鼠卵巢細(xì)胞 |
Hamster |
Ovary |
DMEM |
5-15 |
細(xì)菌選擇：在細(xì)菌培養(yǎng)中，推薦使用濃度為25-100 µg/mL，可以迅速導(dǎo)致未攜帶抗性基因的細(xì)胞死亡。
E. coli對Blasticidin S的敏感性稍差，但是轉(zhuǎn)化子對Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養(yǎng)基（pH 8）進(jìn)行篩選，濃度范圍為50-100 μg/mL Blasticidin S，高pH值可以提高Blasticidin S的活性。
植物細(xì)胞：同樣適用于植物細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移實驗，常用bsr和BSD作為篩選標(biāo)志。
02研究蛋白質(zhì)合成
殺稻瘟菌素S被用于研究肽鍵形成水平上的蛋白質(zhì)合成過程，特別是在TLR-2構(gòu)建體的HEK293-T細(xì)胞和HEK-D5細(xì)胞中的應(yīng)用。
03抗真菌特性
它還具有一定的抗真菌活性，可用于預(yù)防和治療稻瘟病。其殺菌作用主要是影響蛋白質(zhì)的合成，并且能夠抑制孢子萌發(fā)、菌絲發(fā)育和孢子形成。
04其他應(yīng)用
殺稻瘟菌素S也被用于研究腫瘤細(xì)胞的抑制效果。
它還可以作為含有抗性基因bls、bsr或BSD的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的選擇劑。
稻瘟菌素S的相關(guān)實驗步驟（哺乳動物穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選）
1）Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/mL。攜帶bsr或BSD基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，在含有Blasticidin S的正常生長培養(yǎng)基中孵育，用于篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
2）轉(zhuǎn)染后48 h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞傳代（注：細(xì)胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細(xì)胞密度太高，抗生素效率降低。細(xì)胞分盤時覆蓋率最好不超過25%）。
3）每3-4天去除培養(yǎng)基，加入含抗生素的新鮮培養(yǎng)基。
4）7天后檢測細(xì)胞集落形成。根據(jù)宿主細(xì)胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要增加一周或更久。
5）轉(zhuǎn)移5-10個耐受克隆到35 mm細(xì)胞盤中，加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天。隨后用細(xì)胞毒性實驗進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品推薦
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
外觀 |
價格（元） |
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60218ES10 |
10 mg |
液體（濃度為10 mg/mL，in HEPES緩沖液，pH 7.5） |
688 |
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60218ES50 |
5×10 mg |
2446 |
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60218ES60 |
10×10 mg |
4483 |
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60218ES80 |
1 g |
粉末（使用時可用無菌水或者緩沖液配制成5-10 mg/mL的儲存液） |
22595 |
01穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選用抗生素
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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60210ES25/60 |
25 /100 mg |
678/2028 |
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60216ES60/80 |
100/10×100 mg |
453/3353 |
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60217ES20/60 |
20/5×20 mg |
868/3268 |
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60218ES10/50/60/80 |
10/5×10/10×10 mg/1 g |
688/2446/4483/22595 |
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60220ES03/08 |
1/5 g |
358/1480 |
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60224ES03 |
1 g (20 ml) |
849 |
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60225ES03/10 |
1/10 g |
719 /6599 |
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60231ES03/08 |
1/5×1 mg |
1366/4266 |
02穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選用抗生素
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture 細(xì)胞培養(yǎng)用青霉素-鏈霉素（雙抗） |
60162ES76 |
100 mL |
158 |
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60201ES25/60 |
25/100 g |
198/588 |
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60202ES08/25 |
5/25 g |
358/1428 |
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60203ES10/60 |
10/100 g |
108/968 |
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60204ES03/08 |
1/5 g |
106/445 |
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60205ES08/25 |
5/25 g |
48/208 |
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60206ES10/60 |
10/100 g |
169/1436 |
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60207ES25/60 |
25/100 g |
148/488 |
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60208ES25/60 |
25/100 g |
289/1049 |
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60211ES25/60 |
25/100 g |
119/339 |
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60212ES25/60 |
25/100 g |
168/678 |
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60213ES60/80 |
100 mg/1 g |
287/677 |
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60214ES03/08 |
1/5 g |
349/1150 |
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60215ES08 |
5 g |
479 |
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60226ES03/08 |
1/5 g |
102/325 |
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60234ES03/08 |
1/5 g |
159/579 |
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60238ES01/03 |
100 mg/1 g |
479/3349 |
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