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新一代熒光素酶報告基因檢測系統

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2022-06-09T13:46 (訪問量:2812)

新一代熒光素酶報告基因檢測系統

——簡便、更靈敏、更精確


導讀

傳統報告基因檢測系統中多數使用的是螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶檢測體系,但底物需要在氧氣、ATP等同時存在條件下才能被催化發光,其發光信號的半衰期較短,穩定性不佳等缺點,對實驗結果和使用造成影響和不便。針對傳統閃光型(flash type)熒光素的不足,圣生物經過潛心研究開發出新一代的操作更便捷、半衰期更長、穩定性更好的輝光型(glow type)熒光素酶檢測系統,適用于如哺乳動物細胞、原生質體等樣本。

閃光型(flash type)與輝光型(glow type)對比


1

操作流程

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▲ 閃光型(flash type)操作流程,較為繁瑣


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▲ 輝光型(glow type)操作流程,一步完成檢測

2

性能對比

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3

應用方向

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4

數據展示

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▲ Yeasen檢測系統熒光強度和穩定性與P品牌相當。



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▲ Yeasen檢測系統和螢光素酶相互作用,螢光素發光淬滅效果與P品牌相當


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Yeasen檢測系統在常用培養基中正常發光,發光效果差異小于P品牌

FAQ


Q1:雙螢光素酶報告基因最適反應溫度?

A:室溫條件下(20-22℃)。反應組分如細胞裂解產物,底物工作液等都需要調整到室溫,因為兩種螢光素酶的反應速率是受溫度影響,為了保證實驗一致性,推薦反應室溫調至室溫。

Q2:雙螢光素酶報告基因載體該如何選擇?

A:1)螢火蟲螢光素酶建議選取pGL-3或pGL-4或者自己構建的載體。。

2)海腎螢光素酶建議選取pRL-TK或pGL-4載體或者自己構建相應的載體。建議優先選用中等強度的啟動子(如TK),而不使用強啟動子(如SV40、CMV),以免影響主報告基因的表達,或進行實驗摸索選擇合適的載體。

Q3:螢火蟲螢光素酶讀值和海腎螢光素酶讀值的比例多少時比較合適?

A:推薦對照組螢火蟲和海腎螢光素酶的讀值接近,或者海腎螢光素酶比螢火蟲螢光素酶的讀值略高。實際實驗過程中,由于螢火蟲螢光素酶質粒和海腎螢光素酶的質粒抽提的質量不一致,待檢測目的調控元件的調控能力的不同等原因,我們推薦預實驗優化螢火蟲螢光素酶質粒和海腎螢光素酶質粒的共轉染量。

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