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磁珠不只有AMPureXP，一文總結多種高通量測序磁珠類型：DNA\RNA\mRNA磁珠

磁珠是高通量測序文庫構建過程中的必備產品之一，可以純化DNA或RNA、篩選目標大小DN**段，靶向富集目標核酸。隨著測序技術的發展，也開始出現了專精于不同應用領域的磁珠，高通量測序文庫構建中常用到的有DNA純化磁珠、DNA分選磁珠、RNA純化磁珠及mRNA富集磁珠等。

一、DNA磁珠

1. 基本原理

磁珠純化核酸的原理一般是固相可逆固定技術（SPRI：Solid Phase Reversible Immobilization），在一定條件下核酸被選擇性地結合在磁珠上，而污染物則留在溶液中，外加磁場后將吸附了目標分子的磁珠與溶液分離，然后清洗磁珠進一步去除污染物，由于磁珠與核酸分子的結合是可逆的，因此最后在一定條件下可將核酸從磁珠上洗脫下來。

磁珠純化的具體原理為磁珠外表面修飾有硅羥基或羧基官能團，在包含有PEG、高鹽離子等純化緩沖體系中，通過形成DNA-鹽離子-羧基的離子橋而吸附DNA，這種結合是可逆的，在無PEG和鹽離子的TE Buffer中離子橋被解除，最終純化DNA。基于羧基磁珠，使用不同的磁珠投入量和純化Buffer，其吸附片段大小不同，因此進一步也開發了用于DNA分選的磁珠，其分選原理在于磁珠優先吸附大片段DNA，可采用兩輪吸附的方式進行篩選，第一輪用磁珠吸附目的片段以上的大片段，保留上清；第二輪在上清中磁珠吸附目的片段，棄上清；最后將目的片段從磁珠上洗脫下來，以此精準分選目的大小的DN**段。

圖1. 羧基磁珠結構圖

圖2. DNA純化磁珠原理示意圖

2. 操作流程

圖3. DNA純化步驟

圖4 .DNA分選步驟

3. 磁珠使用小技巧

提升得率，精準分選

(1) 使用前要混勻，室溫平衡30min以上使磁珠恢復至室溫；

——磁珠Buffer中的PEG溶解度易受pH、溫度等影響，使用前要平衡至室溫使磁珠重懸均勻，同時使PEG充分溶解，以免影響吸附和分離效果。

(2) 吸附時間要足夠，充分混勻，充分吸附；

(3) 純化或分選時用80%乙醇漂洗；

——80%乙醇下核酸脫水聚集更緊密，不會溶解，用乙醇將體系中殘留的酶、Buffer、雜質等清洗掉，得到更純的文庫。

(4) 分選時，確認樣本體積，確保磁珠加入比例正確；

——磁珠分選的關鍵是準確投入相應的體積，這樣比例才是精準的，因為buffer中PEG和鹽離子濃度的改變都可能會影響分選的結果。

(5) 洗脫晾干時，酒精揮發完全，但要防止磁珠過度干燥開裂；

——通常2~3min即可晾干，磁珠用量大難以晾干時，建議分管操作

(6) 磁珠聚團或板結，可充分混勻后，延長洗脫時間；

——DNA中可能存在雜質，或晾干時間太久造成，一般DNA中雜質較多時建議先純化，然后在進行分選，分選效果更好。

4. 明星產品介紹：是純化磁珠也是分選磁珠

Hieff NGS? DNA Selection Beads 是基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理，采用進口的磁珠原材料及精心優化的緩沖體系，可用于二代測序文庫構建過程中的DN**段分選和純化。本產品適用于各品牌建庫試劑盒，和目前廣泛使用的AMPure XP磁珠使用方式相同，片段回收效率和文庫大小分布與其高度吻合。

4.1 純化性能介紹

● 獨特的緩沖體系：可回收長度低至50bp的DN**段

● 回收率高：高達90%以上

● 純化力好：DNA產物A260/280=1.8-2.0，有效去除引物二聚體、dNTP、無機鹽及蛋白質等雜質

● 應用范圍廣：適用于酶切、連接、克隆、NGS建庫等場景的DNA純化

表1. 不同比例磁珠DNA純化回收效率

圖5. 磁珠純化效果瓊脂糖凝膠電泳結果

圖注：編號為①、②、③為本批次磁珠分裝的前、中、后期抽樣；編號為④是對照AMPure XP 磁珠，M為1kb DNA ladder。

4.2 分選性能介紹

● 操作簡便：分選原理、實驗操作和XP磁珠完全一致

● 分選精準：分選片段大小精準、穩定

● 通用性廣：可用于DNA、RNA建庫，適應各種樣本類型的片段分選

● 超高性價比：品質穩定，更經濟的價格，更短的貨期，更貼心的售前售后服務

圖6. 分選結果展示

二、RNA純化磁珠

Hieff NGS? RNA Cleaner基于SPRI原理制備，可以高效去除蛋白、鹽離子和其它雜質，獲得高純度濃縮的RNA樣本，精心優化的Buffer體系，可有效防止RNA降解。適用于RNA文庫構建、去除rRNA后的總RNA樣本純化、體外轉錄的RNA產物純化、RNA標記產物純化、合成的RNA純化等。

高品質：進口原材料，品質高度穩定

優化的Buffer體系：保證RNA的純度與完整度，有效防止RNA降解

高效率：高效回收，適用RNA文庫構建或體外轉錄產物回收等