Result 5: X1.1載體可以將腦內皮細胞轉化為一個生物工廠，用于將分泌的蛋白質輸送到大腦
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血管在腦區各個角落的分布，使腦血管內皮細胞稱為“生物工廠”成為可能。
SPARCL1/Hevin基因的下調或錯義突變在許多神經系統疾病中都有報道，如自閉癥、精神分裂癥和抑郁癥。在發育中的小鼠視覺皮層中，Hevin對于丘腦皮質連接的形成和可塑性是特別需要的。Hevin基因敲除小鼠(Hevin KO)在出生后的前三周和成年后都表現出明顯的谷氨酸偶體轉運蛋白2陽性(VGluT2+)丘腦皮質突觸的缺失(Figure 4E)。為了確定腦內皮細胞異位表達Hevin是否可以挽救Hevin-KO小鼠的缺陷，作者使用AAV9-X1.1-CAG-Hevin-EGFP的載體，尾靜脈注射Hevin-KO小鼠，3周后，結果顯示：在腦內皮細胞中，Hevin蛋白穩健而特異性的表達(Figure 4F)。結果表明，由腦內皮細胞產生和分泌的Hevin能夠模擬內源性Hevin功能，挽救Hevin-KO小鼠嚴重缺乏的丘腦皮質突觸形成。因此，該系統說明了Hevin相關疾病的潛在治療策略。
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Result 6: X1載體家族在體外有效地轉導人腦內皮細胞
AAV9-X1感染內皮細胞(HBMECs)在MOI為3*104時，X1轉導了42%的HBMEC，比親本AAV9高180倍。進一步設計的版本X1.1和X1.2分別轉導了44%和53%的HBMEC。
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Result 7: X1.1有效地轉導體外培養的獼猴和人腦切片
AAV9-X1在HBMECs中的強大表現促使我們研究它們在系統中的功效，該系統可能更好地模擬非人靈長類動物體內條件。因此，作者轉向體外腦切片培養系統（Figure 5B）。這些切片是從靈長類動物（長尾獼猴，Macaca Nemestrina）的大腦中新鮮提取的，并在體外培養。
7-10天后，我們從組織中提取DNA和RNA，并使用下一代測序(NGS)計算組織中AAV庫中變體的富集程度。與AAV9相比，X1.1的DNA和RNA分別增加了4倍和25倍。值得注意的是，在離體腦切片中，X1.1誘導的蛋白表達主要見于神經元。結果說明：X1.1在獼猴和人類離體切片中的強勁表現(Figure 5F)表明，該衣殼在未來的轉化中具有巨大的潛力。
Result 8: X1.1在靜脈給藥后有效靶向恒河猴的中樞神經系統
完成了AAV9-X1.1在離體NHP和人腦模型中轉導效率的驗證后，作者進行了猴的體內實驗。作者同時測試了AAV9-CAG-EGFP與AAV9-X1.1-CAG-EGFP，兩種載體在新生恒河猴，每只猴5E+13vg/kg，表達4周后，作者觀察到與AAV9相比，X1.1在包括皮層、舌回(LG)、海馬和小腦在內的大腦區域有較強的表達(Figure 6B)，進一步的免疫組化染色顯示，皮層中約98%的X1.1轉導細胞是神經元，而一小部分靶向細胞是內皮細胞或膠質細胞(Figure 6D、E)。X1.1的神經元轉導比AAV9高約45倍(Figure 6F)。
新生獼猴中X1.1的嗜神經譜與嚙齒動物中X1.1的嗜內皮細胞譜之間的差異開辟了潛在的應用，并強調了跨物種分析AAV載體的必要性。這些實驗表明，新的衣殼AAV-X1.1可以有效地轉導舊大陸猴幼猴的中樞神經系統，使其成為研究神經系統疾病的潛在有用載體。
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?小 結
本文講解了一款新載體AAV-X1.1，尚未搭配內皮細胞的特異性啟動子的時候，就已經展現出強勁的血管內皮細胞的精準靶向性。后續的吉凱內部測試中，如果新載體AAV-X1.1，搭配上特異性啟動子（TIE或ICAM2），相信會有更好的效果。此外，作者還通過更換血清型，解決了中和抗體，影響AAV二次給藥的難題。
目前吉凱基因正在生產AAV-X1.1的試用裝，內部測試后，將會推廣給老師們使用。
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