1971年Faulk和Taylor首先將膠體金應用于免疫細胞化學研究,1974年Romano建立了間接免疫金染色法,從此膠體金作為新型的免疫標記技術得到迅速發展。
由膠體金標記技術發展起來的膠體金免疫快速診斷技術主要有兩種:快速斑點免疫金滲濾法和膠體金免疫層析法。后者具有操作簡便(浸入液體中就行)、快速(全程5~10分鐘搞定)、無需儀器設備(結果目測就OK)、試劑穩定、成品易于保存(保質期1~2年)等優點,是科學研究和臨床診斷的有力工具。

膠體金(colloidal gold)即膠體狀態的金單質,因為其單質粒徑非常小可以分散于溶液中形成膠體,故名膠體金。膠體金的常規制備方法是用還原劑還原氯金酸(HAuCl4,橘黃色晶體,易潮解,氯金酸合成見下圖)里的金元素形成金膠體顆粒。這種膠體顆粒在堿性環境下帶上負電荷,可與蛋白質的正電荷基團牢固結合,對蛋白進行標記,用于后續的檢測,如制成膠體金試紙條(卡)進行物質的檢測。
還原氯金酸的化合物很多,通常我們選擇檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7·2H2O)。當用1%檸檬酸三鈉還原100 mL 0.01%金**時,不同體積比可以得到不同粒徑和顏色的膠體金哦!

制備膠體金步驟簡單(見下圖),重點是制備過程所用到的材料都必須是徹底清潔的。例如水至少是雙蒸水,玻璃棒、玻璃容器等要酸洗后沖洗干凈并且最好是硅化的,制備好的膠體金可以加入0.02% NaN3在潔凈玻璃容器內長期存放。

適合于膠體金試紙條(卡)的膠體金粒徑在20~40 nm之間為宜,制備的膠體金溶液呈紅色,膠體金被置于試紙條(卡)的樣品墊下游。當液體樣品滴加后,液體溶解膠體金并帶動其與樣品中的抗原(抗體),在**纖維素膜的毛細作用下從一端慢慢滲移到吸收墊一端,利用抗體/抗原特異性結合及膠休金的顯色(紅色)反應,可以檢測抗原/抗體存在與否。
膠體金試紙條(卡)主要分為雙抗夾心法和競爭法兩類,前者適合檢測大分子物質,后者適合檢測小分子物質。兩種試紙條(卡)的原理見下圖:


除了這兩種常規的方法,間接法也用于膠體金試紙條(卡)的制備,其原理見下圖:

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