?細胞污染全攻略（含防、治妙招）

我擦……

細胞又污染了！

咋整，快崩潰了！！

Who can help me!?！！? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?

君莫急，小翊來幫您！

專治各種細胞疑難雜癥，

小翊送你完整攻略。

攻略一：了解細胞污染?

古人云：知己知彼方可百戰百勝，因此了解細胞污染是非常重要的。常見的污染類型有細菌污染、真菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、病毒污染以及非同種細胞污染。

? ? ? 1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡高倍鏡下大多可見，根據感染細菌種類不同，呈現不同的外形。其培養基一般會變渾濁、變黃較快，對細胞生長狀態影響明顯。

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圖1：細胞受到細菌污染圖

? ??? ??2、真菌：真菌污染在顯微鏡下可以看到絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，呈珊瑚狀，隨時間轉移會長出黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，一般培養基清亮，不變色，不如細菌易被發現，一旦發現有它的存在，細胞污染就比較嚴重了，也很難救活。

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圖2：細胞受到真菌污染圖

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? ? ? ???3、支原體：細菌和真菌造成的污染相對容易發現，然而支原體造成的污染很難察覺，即使生長密度高達?10⁷-10⁹CFU/ml，也很難有污染跡象（渾濁、pH變化等）。支原體污染后導致細胞生長變慢，狀態變差，不會馬上使細胞致死，但會影響細胞內的各種參數，如改變細胞新陳代謝，改變DNA轉染效率。支原體感染細胞以后，細胞病變不明顯，只是慢慢死去。

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圖3：細胞受到支原體污染圖

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? ? ? ? ?4、黑膠蟲*：一般低倍鏡下觀察呈黑色點狀，高倍鏡下可看見黑色物蠕動，培養液不易變渾濁，在細胞增殖旺盛之后會減少或消失。有時也會出現觀測到的運動物明顯增多，細胞狀態變差，最終死亡。（*對于黑膠蟲沒有明確的定論，通常認為黑色物是由于多種原因導致細胞狀態變差、死亡細胞產生的碎片）

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圖4：細胞受到黑膠蟲污染圖

? ? ? 5、原蟲*：該污染在顯微鏡下易觀察到，輕微活動，細胞能生長但繁殖速度明顯減慢，培養基產生渾濁，細胞狀態差，邊緣不清楚，細胞不透亮。其能與細胞共生并爭奪培養基營養，當到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，導致細胞死亡。（*對于原蟲污染傾向于是細菌類污染）

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圖5：細胞受到原蟲污染圖

? ? ? 6、病毒：由于病毒過小導致培養過程中難以觀察。由于在獲得原代細胞過程中沒有完全除去潛在的病毒，導致病毒污染。盡管病毒污染對細胞原代培養不會造成太大影響，但對下游工業生產如生產疫苗等造成安全隱患，因此需要盡量去除。

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?圖6：病毒入侵猴肝臟細胞層圖像（圖?源自悉尼大學）

? ? ? ?7、非同種細胞污染?：這個主要指不同種類細胞產生的交叉污染，由于細胞培養過程中不同種類細胞株所需器材和溶液沒有嚴格分開，導致細胞交叉污染。據報道，世界上已有多種細胞都被HeLa細胞所污染，致使許多實驗宣告無效，因此避免非同種細胞污染也需要引起實驗者的重視。

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圖7：細胞受到非同種細胞污染圖

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攻略二：污染的去除

細胞培養過程中難免會遇到細胞污染，怎么辦？？？

?多數污染是較難完全去除，如果污染的細胞非珍貴且有備用，宜舍棄;

?找到污染源后并清除掉，可復蘇凍存細胞或重新購置細胞培養；

?若污染細胞很珍貴，一時難覓新，針對不同污染小翊給您如下建議。

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攻略三：污染的預防

　　細胞污染是比較難處理，因此預防就顯的尤為重要。對于預防可從以下幾方面著手：

1、?使用抗生素：對細胞培養基使用雙抗（在細胞培養基中推薦青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素為0.1mg/ml。）

2、?支原體預防：可以使用支原體預防試劑預防支原體的污染產生。

3、培養器材、用品需消毒滅菌：細胞培養所用器材要清洗消毒，各種溶液滅菌處理。

4、實驗操作者的無菌意識

　　①洗手消毒，穿隔離衣。工作開始時要用酒精棉球擦手并對器皿進行酒精擦拭；

　　②操作需在生物安全柜內并佩戴口罩；

　　③盡量使用一次性無菌器材操作，對于多次使用的需實高壓滅菌處理。實驗完畢用酒精擦拭操作臺面。

5、細胞交叉污染的預防

　　①一次對多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分；

　　②在進行換液或傳代操作時盡量避免液體濺出污染其他細胞；