登革熱（Dengue）IgM抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
登革熱（Dengue）IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
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使 用 說 明（96T/48T）
[用途]
登革熱屬熱帶傳染病。本試劑盒用于定性檢測(cè)人血清/血漿中登革熱IgM型抗體。
適應(yīng)范圍：
登革熱感染的篩查診斷和監(jiān)測(cè)。
登革熱感染之流行病調(diào)查和藥物療效監(jiān)測(cè)。
[原理]
本試劑盒采用親和素-生物素化登革熱純化抗原預(yù)包被板ELISA 原理，檢測(cè)人血清/血漿中存在的登革熱 IgM 抗體，配以酶標(biāo)記抗人IgM(H+L鏈)單克隆抗體作為標(biāo)記物。加入TMB顯色后終止反應(yīng)，在450nm波長(zhǎng)測(cè)各孔O.D值，O.D值的大小與待檢抗體含量成正比。生物素系統(tǒng)（biotin-avidin system）的穩(wěn)固級(jí)聯(lián)放大作用，使試劑的特異性、靈敏度性、穩(wěn)定性極大地提高是本試劑含有的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)。
[試劑盒組成]
1、純化登革熱抗原預(yù)包被板 1塊（8X12/4X12）
2、陰性對(duì)照 1瓶
3、陽性對(duì)照 1瓶
4、標(biāo)本稀釋液 1瓶（20/10 ml，直接使用）
5、酶結(jié)合物 1瓶（12/5ml）
6、30X濃縮洗液
1瓶（20/10ml，加蒸餾水1：30稀釋使用）
7、顯示劑A、B 各1瓶（5/3ml）
8、終止液（2M H2SO4） 1瓶（5/3ml）
9、說明書 1份
[操作步驟]
將試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封。
1. 加樣：將待檢標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液作1：41（5ul—200ul）稀釋，分別加待檢標(biāo)本及陰陽性對(duì)照100ul各一孔于反應(yīng)板中，設(shè)空白對(duì)照一孔（加100ul標(biāo)本稀釋液），輕拍混勻。
2. 37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板3次并在吸水紙上拍干。
3. 加酶結(jié)合物：每孔2滴，混勻后置37℃溫育30分鐘。同上法洗滌3次并拍干。
4. 顯色：每孔加顯色劑A、B各一滴，輕拍混勻（或震蕩器混勻）后置37℃10分鐘。
[結(jié)果判斷]
1. 目測(cè)：在白色背景下觀察各孔顯色情況，蘭色者為陽性，無色者為陰性。
2. 酶標(biāo)儀測(cè)定：每孔加終止液一滴，混勻后在450nm下測(cè)定各孔O.D值。
① S/N=標(biāo)本O.D值/ 陰性對(duì)照O.D值。
② S/N≥2.1為陽性；
③ 1.5≤S/N<2.1為可疑標(biāo)本; S/N<1.5為陰 性。
④ 陰性對(duì)照(NC)小于0.10時(shí)以0.10計(jì), 大于0.1小于0.21時(shí)以實(shí)際O.D值計(jì)算;若大于0.21時(shí),實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)了較大誤差,需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
⑤ 陽性對(duì)照(PC)值通常≥0.4,實(shí)驗(yàn)成立,否則需重做。
[注意事項(xiàng)]
1. 微孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。
2. 滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時(shí)保持瓶身垂直。
3. 洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。
4. 試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個(gè)月。
5. 避免用溶血、混濁或脂血標(biāo)本。
6. 最好用新鮮標(biāo)本，如需保存，可于2-8℃冷藏48小時(shí)或-20℃凍存4周（樣本應(yīng)避光）。