生物制藥過程中非常關(guān)鍵的一步是找到一個(gè)好的克隆， 通常它是從我們構(gòu)建完成的細(xì)胞池里通過MTX或MSX壓力的篩選獲得我們所希望的高表達(dá)，質(zhì)量符合要求的單克隆株，這是一個(gè)相當(dāng)需要技術(shù)、經(jīng)驗(yàn)、人力和時(shí)間過程。
▲圖一：傳統(tǒng)細(xì)胞株開發(fā)流程
CHOZN?-GS平臺(tái)
它通過提供先進(jìn)的平臺(tái)技術(shù)助力生物制藥工藝開發(fā)，該平臺(tái)包括CHOZN?-GS細(xì)胞株，該細(xì)胞株是通過ZFNs(鋅指核酸酶)技術(shù)敲除了谷氨酰胺合成酶基因，使得細(xì)胞株的存活依賴于外源谷氨酰胺的補(bǔ)充。該特性可以被視為強(qiáng)有力的篩選原理，使得整個(gè)篩選過程無需通過加MTX或MSX壓力便可獲得高表達(dá)的目的克隆。
操作簡單、節(jié)約人力、時(shí)間成本。同時(shí)該平臺(tái)還包括相應(yīng)的培養(yǎng)基，具有指導(dǎo)意義的數(shù)據(jù)以及詳細(xì)的操作手冊，幫助操作者簡單快速的獲得目的克隆并放大到一定規(guī)模。
▲圖二：CHOZN?-GS細(xì)胞株開發(fā)流程
同時(shí)默克還提供另一種助力快速獲得高表達(dá)單克隆技術(shù)---UCOE?
UCOE?是一種普適性染色質(zhì)開發(fā)組件——它們是天然DNA序列與管家基因的啟動(dòng)子區(qū)域有關(guān)。他們被證實(shí)能夠減少甲基化，保持開放的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，允許高穩(wěn)定的表達(dá)。
UCOE?技術(shù)是可以用來做任何位點(diǎn)的一個(gè)所謂的“好位點(diǎn)”。
▲圖三：UCOE?基因及質(zhì)粒
我們在96孔板中通過數(shù)百組的Mini-pool評(píng)估了UCOE?所帶來的益處，可以很明顯的看出采用UCOE?質(zhì)粒能大大的提高高表達(dá)克隆的形成率，進(jìn)而能夠很大程度上節(jié)約我們獲得高表達(dá)克隆的時(shí)間。
▲圖四：Non-UCOE?與UCOE?對(duì)高表達(dá)克隆率的影響
▲圖五：CHOZN?-GS結(jié)合UCOE?克隆生長及產(chǎn)物表達(dá)
▲圖六：CHOZN?-GS結(jié)合UCOE?克隆3L反應(yīng)器驗(yàn)證
通過以上的實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)，我們可以看到UCOE?技術(shù)提高了穩(wěn)定高產(chǎn)克隆的產(chǎn)生率，可減少用于細(xì)胞系開發(fā)所需的時(shí)間和資源，平臺(tái)化的流程可以加快規(guī)模放大和工藝開發(fā)路徑。
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