現在多肽標記及修飾的內容非常多，主要應用在抗原多肽藥物，多肽生物學，多肽講題以及多肽試劑的研究中。目前應用廣泛有，費放射性，熒光標記，生物素標記，磷酸化修飾等，以下是介紹一下每種標記的作用。

1.1．非放射性核素標記

目前在非放射性核素標記中，使用廣泛的仍然是C13，H2，因為其使用安全，放射性小。現在有比較完全的非放射性標記的氨基酸，可以按照正常的多肽合成方法將標記好的氨基酸直接連接到抗原肽多肽上。

1.2．熒光標記

熒光標記由于沒有放射性，實驗操作簡單。因此，目前在生物學研究中熒光標記應用非常廣泛，熒光標記方法與熒光試劑的結構有關系，對于有游離羧基的采用的方法與接肽反應相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。但是對于FITC標記，需要在連接FITC前，增加一個氨基己酸，避免在切割的過程中被TFA切割掉。

1.3．生物素標記

生物素-親合素系統 ，是70年代后期應用于免疫學，并得到迅速發展的一種新型生物反應放大系統。由于它具有生物素與親合素之間高度親和力及多級放大效應，并與熒光素、酶、同位素等免疫標記技術有機地結合，使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進一步提高。主要有用于標記多肽氨基的生物素N-羥基丁二酰亞胺酯(BNHS)和生物素對**酚酯(pBNP)，其中以BNHS最常用，當然，也可以直接使用生物素也可以標記，因為其結構上有個游離的羧基，采用HBTU/HOBt/DIEA方法縮合，由于生物素的溶解度低，使用DMSO/DMF的混合溶劑增加溶解度。

1.4．磷酸肽合成

磷酸肽在生命過程中發揮重要作用，磷酸化的位置在多肽上的Ser，Thr，Tyr。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸，Tyr也可以直接使用磷酸化氨基酸。 磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法，但是目前采用該方法合成磷酸化也有缺點，特別是在合成多磷酸化多肽或長肽的時候，連接效率低，最后產品純度很低，對于這種磷酸化多肽，我們考慮采用后磷酸化方法，其合成過程就是在多肽合成結束后，選擇性脫去要標記的氨基酸的側鏈保護基，對于Tyr，Thr可以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt），在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化，采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體，連接到羥基上，隨后在過氧酸下氧化生成磷?；?，完成反應。

來源：網絡