circRNA生產過程包括：模板制備、體外轉錄、DNA模板去除、環化和純化。在RNA環化后需要用核糖核酸酶R (Ribonuclease R, RNase R)對未環化的RNA進行消化，達到富集circRNA的目的。當前主流使用的RNase R主要為進口品牌，存在價格高、貨期久等問題，不適合用于大批量生產。

翌圣擁有ZymeEditor酶改造平臺和專門為GMP級別產品打造的分子酶生產基地，研發生產出純度高、消化活性強的GMP級別RNase R產品，為新一代RNA疫苗/藥物上市提供助力！

圖1.環狀RNA 生產流程圖

（來源：Front Immunol 2023 Jan 12:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eCollection 2022.）

RNase R（Ribonuclease R, RNase R）是一種來源于大腸桿菌的Mg²⁺依賴性3'→5'核糖核酸外切酶，它能消化所有的線性RNA，不易消化circRNA、套索RNA或3’端突出末端少于7 個核苷酸的雙鏈RNA分子。RNase R常用于去除線性RNA分子，實現富集circRNA和套索RNA等非線性RNA的目的。

主要應用場景為：

1）基因表達研究；

2）可變剪切研究；

3）從生物樣本中富集 circRNA；

4）識別內含子套索結構 RNA；

5）鑒定外顯子 circRNA。

產品特點

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蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%；

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無核酸外切酶殘留；

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與競品相比，產品消化線性RNA能力相當；

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與競品相比，產品對circRNA富集作用相當。

應用案例

案例一

與A進口品牌RNase R產品消化線性RNA能力相當

圖.翌圣RNase R產品與A進口廠家RNase R產品消化線性RNA能力比較：將翌圣RNase R產品與A進口廠家RNase R產品分別投入含有線性RNA底物的反應體系中進行反應，結果顯示當RNase R產品的投入量達到2-4 U時，可觀察到RNA條帶變微弱甚至消失，表明RNase R對線性RNA分子具有消化作用，且翌圣RNase R產品與A進口廠家RNase R產品對線性RNA分子的消化能力相當。

與A進口品牌RNase R產品對circRNA富集作用相當

案例二

圖.翌圣RNase R產品與A進口廠家RNase R產品對circRNA的富集作用比較：將翌圣產品與A進口廠家RNase R產品分別投入含有circRNA底物的反應體系中進行反應，結果顯示經過翌圣RNase R產品與A進口廠家RNase R產品處理后的RNA條帶亮度基本無差別，表明circRNA能耐受RNase R的消化。以上結果證實翌圣產品與A進口廠家RNase R產品均能有效用于circRNA富集。

案例三

翌圣RNase R對線性RNA的切割效果優于其他品牌

圖.翌圣產品與廠家A和B的RNase R消化線性mRNA分子效果比較：將翌圣RNase R產品與廠家A和B的RNase R產品分別投入含有1 μg 線性mRNA底物的反應體系中進行反應，結果顯示翌圣RNase R產品對線性RNA的消化效果優于廠家A和B的RNase R。

產品性能

蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%

圖.蛋白純度檢測：使用SDS-PAGE技術檢測產品的蛋白純度，從左到右依次為相同產品濃度下不同體積（1 μL，2 μL，3 μL）的結果，結果表明翌圣RNase R產品蛋白純度≥95%。

無核酸外切酶殘留

圖.核酸外切酶殘留檢測：將20 U 翌圣RNase R加入到 0.5 μg λDNA- Hind Ⅲ digest中，于37℃孵育4小時，之后進行瓊脂糖凝膠電泳 ，結果顯示DNA 條帶未發生變化，說明翌圣RNase R產品無核酸外切酶殘留。

翌圣環狀RNA 解決方案

產品信息

參考文獻：

1. Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Circular RNA vaccines against SARS-CoV-2 and emerging variants. Cell. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044

2. Chen L, Wang C, Sun H, et al. The bioinformatics toolbox for circRNA discovery and analysis. Brief Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001