circRNA生產(chǎn)過(guò)程包括：模板制備、體外轉(zhuǎn)錄、DNA模板去除、環(huán)化和純化。在RNA環(huán)化后需要用核糖核酸酶R (Ribonuclease R, RNase R)對(duì)未環(huán)化的RNA進(jìn)行消化，達(dá)到富集circRNA的目的。當(dāng)前主流使用的RNase R主要為進(jìn)口品牌，存在價(jià)格高、貨期久等問(wèn)題，不適合用于大批量生產(chǎn)。
翌圣擁有ZymeEditor酶改造平臺(tái)和專(zhuān)門(mén)為GMP級(jí)別產(chǎn)品打造的分子酶生產(chǎn)基地，研發(fā)生產(chǎn)出純度高、消化活性強(qiáng)的GMP級(jí)別RNase R產(chǎn)品，為新一代RNA疫苗/藥物上市提供助力！
圖1.環(huán)狀RNA 生產(chǎn)流程圖
（來(lái)源：Front Immunol 2023 Jan 12:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eCollection 2022.）
RNase R（Ribonuclease R, RNase R）是一種來(lái)源于大腸桿菌的Mg2+依賴(lài)性3'→5'核糖核酸外切酶，它能消化所有的線(xiàn)性RNA，不易消化circRNA、套索RNA或3’端突出末端少于7 個(gè)核苷酸的雙鏈RNA分子。RNase R常用于去除線(xiàn)性RNA分子，實(shí)現(xiàn)富集circRNA和套索RNA等非線(xiàn)性RNA的目的。
主要應(yīng)用場(chǎng)景為：
1）基因表達(dá)研究；
2）可變剪切研究；
3）從生物樣本中富集 circRNA；
4）識(shí)別內(nèi)含子套索結(jié)構(gòu) RNA；
5）鑒定外顯子 circRNA。
產(chǎn)品特點(diǎn)
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蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%；
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無(wú)核酸外切酶殘留；
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與競(jìng)品相比，產(chǎn)品消化線(xiàn)性RNA能力相當(dāng)；
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與競(jìng)品相比，產(chǎn)品對(duì)circRNA富集作用相當(dāng)。
應(yīng)用案例
案例一
與A進(jìn)口品牌RNase R產(chǎn)品消化線(xiàn)性RNA能力相當(dāng)
圖.翌圣RNase R產(chǎn)品與A進(jìn)口廠(chǎng)家RNase R產(chǎn)品消化線(xiàn)性RNA能力比較：將翌圣RNase R產(chǎn)品與A進(jìn)口廠(chǎng)家RNase R產(chǎn)品分別投入含有線(xiàn)性RNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示當(dāng)RNase R產(chǎn)品的投入量達(dá)到2-4 U時(shí)，可觀察到RNA條帶變微弱甚至消失，表明RNase R對(duì)線(xiàn)性RNA分子具有消化作用，且翌圣RNase R產(chǎn)品與A進(jìn)口廠(chǎng)家RNase R產(chǎn)品對(duì)線(xiàn)性RNA分子的消化能力相當(dāng)。
與A進(jìn)口品牌RNase R產(chǎn)品對(duì)circRNA富集作用相當(dāng)
案例二
圖.翌圣RNase R產(chǎn)品與A進(jìn)口廠(chǎng)家RNase R產(chǎn)品對(duì)circRNA的富集作用比較：將翌圣產(chǎn)品與A進(jìn)口廠(chǎng)家RNase R產(chǎn)品分別投入含有circRNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示經(jīng)過(guò)翌圣RNase R產(chǎn)品與A進(jìn)口廠(chǎng)家RNase R產(chǎn)品處理后的RNA條帶亮度基本無(wú)差別，表明circRNA能耐受RNase R的消化。以上結(jié)果證實(shí)翌圣產(chǎn)品與A進(jìn)口廠(chǎng)家RNase R產(chǎn)品均能有效用于circRNA富集。
案例三
翌圣RNase R對(duì)線(xiàn)性RNA的切割效果優(yōu)于其他品牌
圖.翌圣產(chǎn)品與廠(chǎng)家A和B的RNase R消化線(xiàn)性mRNA分子效果比較：將翌圣RNase R產(chǎn)品與廠(chǎng)家A和B的RNase R產(chǎn)品分別投入含有1 μg 線(xiàn)性mRNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示翌圣RNase R產(chǎn)品對(duì)線(xiàn)性RNA的消化效果優(yōu)于廠(chǎng)家A和B的RNase R。
產(chǎn)品性能
蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%
圖.蛋白純度檢測(cè)：使用SDS-PAGE技術(shù)檢測(cè)產(chǎn)品的蛋白純度，從左到右依次為相同產(chǎn)品濃度下不同體積（1 μL，2 μL，3 μL）的結(jié)果，結(jié)果表明翌圣RNase R產(chǎn)品蛋白純度≥95%。
無(wú)核酸外切酶殘留
圖.核酸外切酶殘留檢測(cè)：將20 U 翌圣RNase R加入到 0.5 μg λDNA- Hind Ⅲ digest中，于37℃孵育4小時(shí)，之后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳 ，結(jié)果顯示DNA 條帶未發(fā)生變化，說(shuō)明翌圣RNase R產(chǎn)品無(wú)核酸外切酶殘留。
翌圣環(huán)狀RNA 解決方案
產(chǎn)品信息
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應(yīng)用場(chǎng)景 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品貨號(hào) |
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模板制備 |
10664ES |
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10661ES |
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體外轉(zhuǎn)錄 |
10623ES |
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10629ES |
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10625ES |
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10620ES |
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10621ES |
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10670ES |
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10652ES |
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10653ES |
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10654ES |
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10655ES |
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環(huán)化 |
14652ES |
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14651ES |
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純化 |
14606ES |
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14615ES |
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14616ES |
參考文獻(xiàn)：
1. Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Circular RNA vaccines against SARS-CoV-2 and emerging variants. Cell. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
2. Chen L, Wang C, Sun H, et al. The bioinformatics toolbox for circRNA discovery and analysis. Brief Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001