分子篩排阻層析(凝膠過濾)是一種根據(jù)生物分子的大小及形狀來分離物質(zhì)的層析方法,凝膠過濾介質(zhì)為多孔的網(wǎng)狀結構,樣品流經(jīng)填料時,各組分之間存在分子量的差異,較大的分子率先從層析柱中流出,而分子量越小的生物分子進入介質(zhì)內(nèi)部越深,故在介質(zhì)中的停留時間越長。
分子篩層析的特點
· 非吸附層析,分辨率與實驗條件無關
· 操作簡便,僅需一種緩沖液
分子篩層析的分類
Bestdex系列:葡聚糖凝膠
· Bestdex G系列數(shù)字越小交聯(lián)度越大,形成的平均孔徑越小,分離范圍也會越小,常用于蛋白質(zhì)、多糖、核酸等生物樣品的脫鹽與緩沖液的置換,也可用于多肽、寡核苷酸、天然產(chǎn)物、化學藥物的分離純化。
· Bestdex LH-20是在Bestdex G-25F的基礎上用羥丙基修飾而成的,引入羥丙基后使得該介質(zhì)同時具備親水性和親脂性,可以使用有機溶劑作為流動相,適合于天然產(chǎn)物的分離純化以及化學藥物的精細純化。
Bestarose系列:瓊脂糖凝膠
· Bestorse 4B/6B分別為4%和6%的瓊脂糖經(jīng)乳化、漂洗、分篩而成的凝膠過濾介質(zhì),非特異性吸附性低,基質(zhì)軟,具有寬闊的分離范圍,適合分離分子量大小差異大并對分辨率要求不高的樣品,適用于多糖、核酸、病毒等生物大分子的分離純化或檢測。
· BestorseCL-4B/CL-6B是在Bestarose 4B/ 6B的基礎上用雙功能交聯(lián)劑2,3-二溴丙醇交聯(lián)而成的,分離范圍相同,物理化學性能比Bestarose 4B/ 6B有了明顯的提高,適合含有機溶劑的分離,可以耐受較強的在位清洗及121℃高壓滅菌。
· Bestorse FF也是在Bestarose 4B/ 6B的凝膠基礎上用雙功能交聯(lián)劑交聯(lián)而成的,交聯(lián)程度比Bestarose CL-4B/ CL-6B高,物理化學性能更穩(wěn)定,該類介質(zhì)可以耐受121°C高壓滅菌,流速快,適合在大規(guī)模分離純化中應用。
Chromdex系列:高交聯(lián)度瓊脂糖為骨架,以交聯(lián)葡聚糖為填充
粒徑34μm,是分辨率與選擇性最高的凝膠過濾填料,硬度大,流速快,物理化學性質(zhì)穩(wěn)定,非特異性吸附低,是精細純化階段的良好選擇。
分子篩層析應用范圍
· 組分離
大分子樣品與離子之間的分離,上樣體積可以達到柱體積的30%,可用于脫鹽與置換緩沖液。
· 精細分離
分析純化:分析純化的樣品應達到分析純度,用量少,層析柱柱高在15-30cm比較適宜,上樣體積在柱體積的0.3%-0.5%之間,確保高分辨率的同時節(jié)省實驗時間與緩沖液;
制備樣品:應用于去除聚集體、分離不同大小分子量的蛋白,柱高應高于60 cm,上樣體積在柱體積的0.5%-4%之間。
· 分子量的測定
利用標準蛋白確定相對分子量與其在凝膠過濾層析介質(zhì)中的保留時間之間的關系,測定未知分子的相對分子質(zhì)量。
每種介質(zhì)的孔徑都有一定的范圍,選擇凝膠過濾介質(zhì)關鍵在于選擇合適的分離范圍,當分子量處于填料的分離區(qū)間內(nèi)且組分分子量相差一倍以上時可保證良好的分離效果。
關于博格隆
博格隆成立于2008年,是一家專注于為分離純化提供高質(zhì)量層析介質(zhì)的高新技術企業(yè),是中國較早具備大規(guī)模生產(chǎn)分離純化介質(zhì)能力的企業(yè)之一。博格隆所提供的產(chǎn)品涵蓋各類分離純化介質(zhì)、預裝柱、實驗室及工業(yè)生產(chǎn)級空柱、微載體,同時提供分離純化工藝開發(fā)服務及填料定制。
