分子篩排阻層析(凝膠過濾)是一種根據生物分子的大小及形狀來分離物質的層析方法,凝膠過濾介質為多孔的網狀結構,樣品流經填料時,各組分之間存在分子量的差異,較大的分子率先從層析柱中流出,而分子量越小的生物分子進入介質內部越深,故在介質中的停留時間越長。
分子篩層析的特點
· 非吸附層析,分辨率與實驗條件無關
· 操作簡便,僅需一種緩沖液
分子篩層析的分類
Bestdex系列:葡聚糖凝膠
· Bestdex G系列數字越小交聯度越大,形成的平均孔徑越小,分離范圍也會越小,常用于蛋白質、多糖、核酸等生物樣品的脫鹽與緩沖液的置換,也可用于多肽、寡核苷酸、天然產物、化學藥物的分離純化。
· Bestdex LH-20是在Bestdex G-25F的基礎上用羥丙基修飾而成的,引入羥丙基后使得該介質同時具備親水性和親脂性,可以使用有機溶劑作為流動相,適合于天然產物的分離純化以及化學藥物的精細純化。
Bestarose系列:瓊脂糖凝膠
· Bestorse 4B/6B分別為4%和6%的瓊脂糖經乳化、漂洗、分篩而成的凝膠過濾介質,非特異性吸附性低,基質軟,具有寬闊的分離范圍,適合分離分子量大小差異大并對分辨率要求不高的樣品,適用于多糖、核酸、病毒等生物大分子的分離純化或檢測。
· BestorseCL-4B/CL-6B是在Bestarose 4B/ 6B的基礎上用雙功能交聯劑2,3-二溴丙醇交聯而成的,分離范圍相同,物理化學性能比Bestarose 4B/ 6B有了明顯的提高,適合含有機溶劑的分離,可以耐受較強的在位清洗及121℃高壓滅菌。
· Bestorse FF也是在Bestarose 4B/ 6B的凝膠基礎上用雙功能交聯劑交聯而成的,交聯程度比Bestarose CL-4B/ CL-6B高,物理化學性能更穩定,該類介質可以耐受121°C高壓滅菌,流速快,適合在大規模分離純化中應用。
Chromdex系列:高交聯度瓊脂糖為骨架,以交聯葡聚糖為填充
粒徑34μm,是分辨率與選擇性最高的凝膠過濾填料,硬度大,流速快,物理化學性質穩定,非特異性吸附低,是精細純化階段的良好選擇。
分子篩層析應用范圍
· 組分離
大分子樣品與離子之間的分離,上樣體積可以達到柱體積的30%,可用于脫鹽與置換緩沖液。
· 精細分離
分析純化:分析純化的樣品應達到分析純度,用量少,層析柱柱高在15-30cm比較適宜,上樣體積在柱體積的0.3%-0.5%之間,確保高分辨率的同時節省實驗時間與緩沖液;
制備樣品:應用于去除聚集體、分離不同大小分子量的蛋白,柱高應高于60 cm,上樣體積在柱體積的0.5%-4%之間。
· 分子量的測定
利用標準蛋白確定相對分子量與其在凝膠過濾層析介質中的保留時間之間的關系,測定未知分子的相對分子質量。
每種介質的孔徑都有一定的范圍,選擇凝膠過濾介質關鍵在于選擇合適的分離范圍,當分子量處于填料的分離區間內且組分分子量相差一倍以上時可保證良好的分離效果。
關于博格隆
博格隆成立于2008年,是一家專注于為分離純化提供高質量層析介質的高新技術企業,是中國較早具備大規模生產分離純化介質能力的企業之一。博格隆所提供的產品涵蓋各類分離純化介質、預裝柱、實驗室及工業生產級空柱、微載體,同時提供分離純化工藝開發服務及填料定制。
