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干貨 | 你對“全能選手”DNase I 了解多少？

作者：翌圣生物科技（上海）股份有限公司 2022-04-18T16:11 (訪問量:8136)

干貨 | 你對“全能選手”DNase I 了解多少？

脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I, DNase I），是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA的非特異性核酸內切酶。它能夠水解磷酸二酯鍵，產生含有5'-磷酸基團和3'-OH基團的單脫氧核苷酸和寡脫氧核苷酸。DNase I最佳的工作pH范圍是7-8，其活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Mn2+，Mg2+，Zn2+等激活。在Mg2+存在條件下，DNase I 隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；Mn2+存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘末端。

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圖1：DNase I在Mg2+以及Mn2+存在下可切割dsDNA原理圖

常見的DNase I主要從牛胰腺中純化或為重組酶。與從牛胰腺中純化的DNase I相比，重組酶來源的內源性RNase水平相對較低或者能夠制備成無RNase產品形式，更適合對RNase敏感的應用，如從RNA樣品中去除DNA。

DNase I 的應用


提到應用，DNase I除了大家熟知的用于維護RNA完整性相關實驗，如提取不含DNA的RNA，反轉錄前制備無gDNA的RNA模板以及體外轉錄后降解DNA模板外，還可用于rRNA去除中消化DNA探針，缺口平移進行DNA標記，足跡法分析DNA-蛋白質相互作用，生成隨機的DNA文庫，減少細胞裂解物或蛋白提取物的粘性，在細胞培養過程中作為添加物來消化細胞間的粘連，在細胞凋亡TUNEL檢測中部分剪切基因組DNA作為陽性對照等。綜上所述，DNase I幾乎可用于任何需要酶切DNA的應用中。下面小編簡單介紹幾種常見的應用。

“

RNA提取或反轉錄前去除gDNA


RNA作為實驗室常研究的樣本，其質量的高低很大程度上會直接影響實驗數據的質量。一般在RNA提取過程中無法完全避免gDNA殘留，因此，在進行具有挑戰性的下游應用（例如mRNA表達量分析，轉錄組分析等）之前，通常建議對RNA樣本進行DNase I處理，消化殘留的gDNA。消化gDNA步驟可以在RNA提取期間、RNA提取后或者RNA反轉錄之前進行。

表1：RNA提取或反轉錄前去除DNA相關產品列表

“

體外轉錄去除模板DNA


體外轉錄（IVT）主要是以DNA為模板，加上對應的底物和緩沖液通過體外轉錄得到RNA。在體外轉錄實驗中，常用T7，T3，SP6等RNA聚合酶進行RNA合成，合成后的RNA可能會有DNA殘留，消除DNA殘留有利于下游實驗的開展。如在mRNA疫苗開發階段，殘留的去除是關鍵的步驟，可以減少下游純化難度并增加產品的純度。通常使用Recombinant DNase I (RNase-free) 去除模板DNA。
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圖2：線性化質粒為模板體外轉錄過程

表2：mRNA合成相關產品列表

      
    
        
      
            
      mRNA合成流程
      		
            
      產品名稱
      		
            
      貨號
      		
        
      
        
      
            
      模板制備
      		
            
      Hieff Canace? Plus High-Fidelity DNA Polymerase高保真酶
      		
            
      10148ES
      		
        
      
        
      
            
      Hieff Clone? Universal One Step Cloning Kit 無縫克隆試劑盒
      		
            
                                     
      
                                         
      
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      地 址： 上海市浦東新區天雄路166弄一號樓三層南單元
      
                                        
      聯系人： 李自轉
      
                                        
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      傳 真： 021-34615995-188
      
                                        
      Email：lizizhuan@yeasen.com
      

                                    
      
                                
                                
      
                                    
                                    
      
                                        
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