從圣湘上市看上游分子酶產業發展之細--RNasin

今年的新冠疫情，幾乎打亂了大多數IVD企業的腳步。在疫情開始初期，IVD企業便一路乘風破浪，開足馬力拼研發速度、拼注冊速度、拼宣傳速度、拼銷售速度，都希望能夠快速占領市場、躋身前列，實現“名利雙收”。然而只有擁有優秀的生產、質控、監督管理體系的企業，才可以在疫情中快速通過認證并上市。其中圣湘生物一季度凈利潤增長32倍，于6月23日實現科創板首發過會，無疑是真正的贏家。而IVD領域上游分子酶原料企業，亦功不可沒。

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國內分子酶原料現狀

隨著國內體外診斷廠家的崛起，原料公司在近幾年呈快速發展趨勢。我國分子酶原料廠家以北京、上海、廣州-深圳為中心分布，國內IVD原料競爭之激烈可見一斑。與此同時，隨著IVD終端市場的競爭逐步加劇，IVD的戰火也引至上游原料領域 。眾所周知，早期95%以上的IVD核心酶原料市場幾乎被德國羅氏、日本東洋紡、英國NEB等進口公司占據。究其原因還是核心原料被這些進口廠商所壟斷，受制于人的現象非常明顯。深究原因，上游IVD試劑原料的品質至關重要。

原料是產品的源頭，源頭不合格，就根本談不上終端產品的質量。上游原料企業都應為自己的產品質量負責，從產品風險著手，建立質量體系和監督管理體系。同時企業應定期進行內審，認真核查質量體系是否存在缺陷，并針對每一缺陷項進行整改和跟進，具體措施做好記錄和分析。質量體系應及時進行狀態的更新，有效控制產品的質量，不斷完善體系的科學性和有效性。建立原料生產與質控體系非一日之功，IVD終端企業首先應選擇具有規?；a能力的原料企業，精準把握原料控制。翊圣生物作為分子酶企業的創新領導者，在體系建設上嚴格把控，同時積極布局未來之路。這里我們以新冠核酸檢測試劑盒中的關鍵輔料為例，細說翊圣高品質制造。

新冠核酸檢測試劑盒明細

市面上已報證的新冠檢測試劑盒中大多包含5個組成部分：核酸擴增反應液、酶混合液、引物探針、陽性對照和陰性對照。陰性和陽性對照主要是為了保證檢測結果的準確性，而檢測的靈敏度主要取決于酶混合液，即逆轉錄酶的效率和Taq酶的靈敏度。從新冠檢測試劑盒的常規組分中可以看到上游原料部分主要包含熱啟動Taq酶、逆轉錄酶等核心酶、引物探針、對照用假病毒。然而核心酶組分中RNasin的作用也不可小覷，直接決定最終檢測結果的成敗。在常規RNA相關的實驗中，RNasin幾乎隨處可見。

2 用于RNA提取實驗中防止RNA降解

2 cDNA合成、體外轉錄實驗

2 一步法RT-PCR體系

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表1 新冠檢測試劑盒常規組分

何為RNasin？

RNase抑制劑（RNase inhibitor），也稱RNasin。最早是存在于人胎盤中的一種特異性核糖核酸酶(RNase)抑制劑，分子量是50 kDa的蛋白質。其特異性失活RNase的原理是可與內源性或外源性RNase以非共價鍵結合形成復合體，造成RNase失活，從而保護RNA的完整度?？?/span>廣泛抑制RNase A、RNase B和RNase C這三種酶的活性，保護RNA不被這三種酶降解。

RNase抑制劑的類別較多，但市面上的RNase抑制劑大多是重組的非人源蛋白，與其它競爭性抑制劑(核酸類、無機磷酸類)不同，RNasin可以很容易地通過苯酚處理將其從反應體系中除去，而且純度和產量更高，無人源DNA的污染，故用途更廣。

圖2：RNase 抑制劑分類

翊圣提供高品質RNasin

翊圣RNasin是以可溶形式在大腸桿菌中表達純化的重組鼠源RNase抑制劑，在常見的核酸酶殘留、切口酶和大腸桿菌殘留等方面嚴格把控質檢體系。RNasin能夠廣泛抑制各種類型RNase(RNase A、B和C)，經RT-PCR、RT-qPCR檢驗，可與常規逆轉錄酶及各種DNA Polymerase兼容。同時與人源RNase inhibitor相比，翊圣RNasin不含人源蛋白中的兩個對氧化非常敏感的半胱氨酸，因而具有更高的抗氧化活性。同時，更加適合于對高DTT敏感性實驗(如qPCR等)。

案例展示：

實驗目的：翊圣RNasin的靈敏度和批次穩定性測試

實驗方法：熒光PCR法檢測丙型肝炎病毒HCV，RT-qPCR體系中驗證三個批次的翊圣RNasin(40 U)靈敏度，陰性小牛血清稀釋HCV標準品至E3,10IU/ml（x10）

結果分析：RNasin批次無明顯差異，靈敏度均10/10檢出；陰性無檢出。