有了外泌體，miRNA的春天又來啦！
常常聽到很多老師無可何地說：現在miRNA已經過時了，別說發高分文章了，連一般的paper都不好發了，我還是不要研究miRNA了吧……
各位老師不要灰心，今天我們就給miRNA帶來了一劑良藥，讓miRNA研究再次迎來它的春天！
相信很多老師都已經注意到了，現在外泌體研究如火如荼，近幾個月國內新出的關于外泌體的報道，每個月都在100篇左右，研究涉及各個領域，其中不乏很多高分paper。
更有趣的是，很多老師覺得再也沒有研究意義的miRNA，在外泌體研究領域簡直就是遍地開花呀！
下面我們一起來看看在神經退行性疾病領域，miRNA遇到外泌體會怎樣？
基礎篇
問題：癡呆是老年人最常見的神經退行性疾病，目前沒有合適的相關生物標志物，如何尋找用于診斷癡呆和評估疾病的進展的生物標志物？
方法：Q-PCR驗證備選的3個miRNA：miR-137，miR-155和miR-223，32名癡呆癥的患者，16名沒有癡呆的志愿者作為對照；血清外泌體，Q-PCR初篩3個備選的miRNA。
結果：
首先對臨床血清樣本的外體進行抽提鑒定，確定抽提到的是外泌體，然后在血清樣本中直接檢測了三個備選miRNA：miR-137，miR-155和miR-223的表達，發現miR-223在癡呆病人的血清中顯著下調。
進一步在血清外泌體樣本中驗證miR-223，發現和血清中的表達趨勢一致。癡呆患者血清外泌體miR-223水平與CDR評分，MMSE評分，mI / Cr和NAA / Cr有很好的相關性
結論：血清外泌體miR-223是一種潛在的生物標志物，能夠用于診斷癡呆和評估疾病的進展。
血清外泌體樣本+Q-PCR篩選（3個miRNA）+Q-PCR驗證（1個miRNA），So Easy
進階篇
問題：額顳葉癡呆（FTD）患者的腦脊液（csF）中的外泌miRNas是否可以作為診斷生物標志物目前未知，而且哪些miRNA可以作為FTD的診斷標志物也未知
方法：兩大類樣本：一、遺傳性額顳癡呆（GeNFI）隊列：23個無癥狀的突變攜帶者；15個有癥狀的突變攜帶者；11個健康的非突變攜帶者。二、散發性額顳癡呆隊列：17例散發性FTD患者；13例散發性阿爾茨海默病（AD）；10名年齡相近的健康對照；腦脊液外泌體，Q-PCR arrays初步篩選以上樣本腦脊液外泌體中752個miRNA的表達。
結果：
通過Q-PCR array初步篩選752個miRNA以后，發現了8個潛在的miRNA，接下來在不同突變類型攜帶者有癥狀和無癥狀的樣本中進一步Q-PCR驗證這8個miRNA，最后發現miR-204-5p 和miR-632在有癥狀的突變攜帶者中明顯下調。
通過ROC曲線分析，腦脊液外泌體miR-204-5p和miR-632的表達在特異性和敏感性上都能夠用于區分有癥狀和無癥狀的突變攜帶者。
通過ROC曲線分析，腦脊液外泌體miR-204-5p和miR-632的表達在特異性和敏感性上都能夠用于區分有癥狀和無癥狀的突變攜帶者。
在散發性的FTD、散發性的AD和健康人的腦脊液外泌體中進一步通過Q-PCR驗證miR-204-5p 和miR-632的表達，結果表明相對于散發性的AD和健康人，散發性的FTD中miR-623的表達顯著降低，而miR-204-5p在三組中沒有差別；ROC曲線分析，驗證了miR-623區分三者的特異性和敏感性。
對miR-204-5p和miR-623進行靶基因的分析，發現miR-204-5p有375個靶基因，miR-623有38個靶基因，這些mRNA富集到了人額顳葉mRNA，并且主要涉及到Wnt信號通路。
腦脊液外泌體樣本+ Q-PCR arrays +Q-PCR驗證
高級篇
問題：阿爾茨海默?。ˋD）的早期診斷還沒有統一的標準，本研究的目的在于尋找健康和AD患者的血清外泌體生物標志物。
方法：三組樣本：一、健康（HC）23個；二、輕度認知障礙（MCI）3個；三、阿爾茲海默癥（AD）23個。血清外泌體，NGS深度測序
結果：
NGS深度測序結果發現17種miRNA顯著失調。
通過對失調miRNA的聚類分析，發現失調的miRNA主要集中在兩個簇；分析了不同簇的miRNA的表達與APOE ε4等位基因的狀態以及臨床分類的相關性，并且按照對臨床分類的貢獻的重要性對miRNA進行排序。
再在另外60個血清外泌體樣本中Q-PCR驗證16個miRNA的表達。
血清外體樣本+NGS（深度測序）+Q-PCR驗證
看到上面的文章分析，老師們有沒有很激動？是不是感覺啥也沒做，收集一下臨床樣本，抽提一下外泌體，通過組學手段找找潛在的miRNA，然后Q-PCR驗證這些潛在的miRNA，最后確定一個或多個外泌體miRNA作為神經退行性疾病的潛在診療biomarker，就可以發文章了！
小編都不敢相信這是真的，曾經我們以為沒有什么可做了，不好發文章的miRNA，和外泌體結合以后這么厲害！老師可以行動起來了，收集臨床樣本了，外泌體—miRNA—biomarker走一波~~
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