?Cell Meter TUNEL凋亡檢測試劑盒?紅色熒光是美國AAT Bioquest研發的用于檢測細胞凋亡的試劑盒，DN**段化代表晚期細胞凋亡的特征。該試劑盒可提供所有必需成分，并具有優化的測定方案。適用于熒光酶標儀，熒光顯微鏡或流式細胞儀。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的細胞凋亡檢測試劑盒。
光譜：
光譜性質
消光系數：27500
Ex:? ? ? ? ? ? ? ? ??549?
Em：? ? ? ? ? ? ?648
適用儀器
流式細胞儀
Ex:? ? ?488 nm
Em：???660/20 nm??
通道:???PE-Cy5 通道
熒光顯微鏡
Ex:? ??TRITC 濾波片組
Em:???TRITC 濾波片組
推薦孔板:?黑色透明底板
熒光酶標儀
Ex:? ??550 nm
Em：? ?590 - 650?nm
Cutoff：?570 nm
推薦孔板:?純黑色孔板
實驗方案
樣品實驗方案
簡要概述
1.?用測試化合物準備細胞。
2.?與TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分鐘至1小時。
3.?洗滌細胞。
4.?用4％甲醛（可選）固定細胞。
5.?用帶FITC濾光片的熒光顯微鏡或帶FITC通道的流式細胞儀。讀取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）處的熒光強度。
?溶液配制?
工作溶液配制
將0.5μL的100X Tunnelyte Green（組分A）添加到50μL的反應緩沖液（組分B）中，使總體積為50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意：應單獨評估每個細胞系，以確定細胞密度。?
實驗步驟
1.根據您的特定協議，將細胞培養至密度以誘導凋亡。 對于在96孔板培養物中生長的貼壁細胞，我們建議大約30,000至50,000個細胞/孔，對于非貼壁細胞，建議大約1至2 x 106細胞/ mL。 同時，在每種標記條件下，用誘導群體相同的密度培養非誘導陰性對照細胞群體。 注意：我們用100 nM-1 μM星形孢菌素處理HeLa細胞4小時，以誘導細胞凋亡。
2.染色和固色：
2.1取出細胞培養基。
2.2向每個樣品中添加50μL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分鐘。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 μL /孔的PBS洗滌細胞1-2次。
2.5向每個樣品中添加100uL反應緩沖液（組分B）。
2.6使用Ex / Em = 550/590-650 nm（Cut off= 570 nm）的熒光酶標儀，帶TRITC濾光片的熒光顯微鏡或帶FL3通道的流式細胞儀檢測熒光強度。
2.7可選：從步驟5中移出反應緩沖液，并向每個孔中添加100 μL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定緩沖液（未提供）。注意：對于非貼壁細胞，請添加所需量（例如2X106細胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室溫下將平板孵育20至30分鐘。
2.9去除固定劑。
2.10用PBS洗滌細胞2-3次，并用100μL PBS /孔/ 96孔板替換。
2.11使用Ex / Em = 550/590-650nm（Cut off= 570 nm）的熒光酶標儀，帶TRITC濾光片的熒光顯微鏡或帶FL3通道的流式細胞儀檢測熒光強度。
2.12可選：用1X Hoechst（組分C）在Ex / Em = 350/460 nm處染色細胞核，以進行圖像分析
圖1.與未處理的對照相比，用 100 nM 或 1 μM 星形孢菌素 (SS) 處理 4 小時后 HeLa 細胞中 TUNEL 反應的熒光圖像。細胞與 TUNEL 工作溶液在 37oC 下孵育 1 小時。使用具有 TRITC 濾光片組的熒光顯微鏡分析紅色熒光信號。熒光標記的 DNA 鏈斷裂在 SS 處理的細胞中顯示出強烈的熒光染色。
圖2.?TUNEL 染色定義的 BM 中凋亡的 PCa 細胞。PCa細胞被泛細胞角蛋白識別為綠色，TUNEL信號以紅色顯示。比例尺，20 微米。資料來源：Axl 是 TGF-β2 誘導的骨髓中前列腺癌細胞休眠所必需的，?Yumoto 等人，《科學報告》，2016 年 11 月。
?