E. coli RNase H（E. coli 核糖核酸酶 H）是一種能夠特異性降解RNA-DNA雜交鏈中RNA部分的酶，在DNA復制、修復和轉錄等過程中發揮重要作用。它通過切割RNA鏈，確保DNA模板的完整性和穩定性，因此在分子生物學實驗中被廣泛應用，例如cDNA合成、rRNA去除和RNA干擾研究。然而，RNase H 在使用過程中也存在一些缺陷：1）它可能對單鏈RNA或DNA產生非特異性切割，影響實驗結果的準確性；2）其熱穩定性較差，難以在高溫條件下保持活性，因此不適用于高溫逆轉錄、PCR等需要高溫環境的實驗。這些局限性促使研究人員開發熱穩定RNase H，以拓展其應用范圍并提高實驗效率。
圖1.RNase H作用機理
源自Thermus thermophilus的Thermostable RNase H（熱穩定核糖核酸酶H）是E. coli RNase H的同源物，在功能上表現出相似的核糖核酸內切酶特性。它能夠精準識別并高效切割 RNA:DNA雜交體中的RNA鏈磷酸二酯鍵，同時確保DNA鏈的完整性。通過對蛋白結構的深入分析發現，盡管T. thermophilus RNase H的整體穩定性分布與E. coli RNase H具有一定相似性，但前者在整體穩定性以及殘基局部穩定性方面均表現出顯著提升。Thermostable RNase H的最佳活性溫度在65℃以上，更高的反應溫度能夠顯著提升反應的特異性和效率，減少非特異性切割。這一特性使其在分子生物學實驗中展現出廣泛的應用潛力，例如：
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rRNA去除；
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mRNA加帽率檢測；
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去除雜交到poly(dT)上的mRNA poly(A)；
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cDNA第二鏈合成中去除mRNA；
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提升高溫逆轉錄、等溫擴增、PCR實驗的擴增效率。
圖2.Thermostable RNase H和E. coli RNase H三維結構圖[1]
Thermostable RNase H常用于病原菌檢測實驗中，如在宏基因組測序（mNGS）和病原靶向測序（tNGS）中常用于rRNA去除實驗，若分子酶中存在宿主或其他背景菌核酸殘留，可能會嚴重影響檢測結果的準確性。為此，翌圣生物基于UCF.ME®超潔凈工藝技術推出UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545)，該產品由UCF.ME®超潔凈分子酶生產基地生產，從物料篩選到環境控制，從工藝優化到質量檢測，每一環節均經過嚴格把控，確保極低的背景菌gDNA殘留和核酸酶殘留，為實驗結果的準確性、可靠性和重復性提供了強有力的保障。
產品優勢
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活性強、批間一致性好；
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極低宿主 gDNA 殘留：＜0.02 Copies/U；
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無核酸外切酶、切口酶、RNase 酶殘留；
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優異的穩定性：在4℃處理32天、25℃處理16天和37℃處理7天后，酶活性無明顯下降。
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產品名稱 |
貨號 |
規格 |
目錄價 |
活動價 |
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UCF.ME® Thermostable RNase H |
14545ES72 |
250 U |
759元 |
0元 |
活動細則：
1、活動時間：2025年3月5日-2025年3月31日；
2、活動名額有限，每位客戶限一套。
性能展示
翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545)
01
活性強、批間一致性好
使用3批次UCF.ME® Thermostable RNase H分別與RNA:DNA 底物進行孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實驗結果表明，翌圣0.05 U的UCF.ME® Thermostable RNase H能有效切割20 pmol RNA:DNA底物中的RNA，且批間一致性優異，展現了產品的高穩定性和可靠性。
圖3.UCF.ME® Thermostable RNase H活性檢測結果
注：反應條件：50℃ 20min；RNA:DNA底物-20 pmol
02
宿主gDNA殘留低：＜0.02 Copies/U
通過對不同批次的UCF.ME® Thermostable RNase H進行宿主（E.coli）gDNA殘留檢測，結果顯示，3批次產品的宿主gDNA殘留量均遠低于0.02 copies/U，確保了產品的高純度和實驗的可靠性。
圖4.UCF.ME® Thermostable RNase H宿主gDNA殘留結果
03
無核酸外切酶、切口酶、RNase酶殘留
將25 U UCF.ME® Thermostable RNase H分別與核酸底物孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實驗結果表明，翌圣的3個批次UCF.ME® Thermostable RNase H均未檢測到核酸外切酶、切口酶或RNase殘留，為實驗結果的準確性和可靠性提供了有力保障。
圖5.UCF.ME® Thermostable RNase H核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測結果
04
穩定性好
將UCF.ME® Thermostable RNase H分別置于4℃處理32天、25℃處理16天和37℃處理7天后，測定其酶活。結果顯示，酶活均無明顯下降，充分證明了翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H在寬溫度范圍內具有優異的穩定性，能夠滿足不同實驗條件的長期存儲和使用需求。
圖6.UCF.ME® Thermostable RNase H加速穩定性結果
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來源 |
產品名稱 |
貨號 |
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T. thermophilus |
UCF.ME® Thermostable RNase H |
14545ES |
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E. coli |
RNase H |
12906ES |
參考文獻：
[1] Hollien J, Marqusee S. Structural distribution of stability in a thermophilic enzyme[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.
[2] Wolf E J , Dai N , Chan S H .Selective Characterization of mRNA 5′End-Capping by DNA Probe-Directed Enrichment with Site-Specific Endoribonucleases[J].[2025-03-03].
[3] Gu H , Sun Y H , Li X Z .Novel rRNA-depletion methods for total RNA sequencing and ribosome profiling developed for avian species[J].Poultry Science, 2021, 100(7):101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.