RNase蛋白抑制劑（RNase inhibitor）是一種大小為 50 kDa左右的酸性糖蛋白，能夠特異地與RNase以非共價鍵結合形成復合體，造成RNase失活，可抑制各種類型RNase (RNase A, B, C)，從而保護RNA的完整度，已被廣泛應用于RT-qPCR、mNGS、tNGS等病原檢測方法中。
?
圖1.RNase Inhibitor與RNase A結合示意圖[1]
（紅色：RNase A；藍色：RNase Inhibitor）
?
翌圣ZymeEditor?酶改造平臺通過對RNase?Inhibitor進行改造，獲得了兼容性更好的重組豬源RNase?Inhibitor:?UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)。本產品對各種逆轉錄酶和聚合酶活性無影響，如搭配翌圣全能型逆轉錄酶Hifair??Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) (Cat#14604ES)，經驗證可廣泛應用于RT-PCR/qPCR、RNA-seq、單細胞測序、cDNA克隆和文庫構建等多個應用場景。此外，本產品經過翌圣生物UCF.ME?超低殘留工藝處理，宿主殘留更低，適合對背景菌要求更為嚴格的應用場景，如病原微生物檢測等。
?
?
產品特點
- UCF.ME??超低殘留：大腸桿菌DNA殘留水平＜0.1 copies/100 U；
- 核酸酶殘留低：無核酸外切酶、切口酶、RNase殘留；
- 廣譜RNase抑制活性：可抑制包括RNase A、RNase B、RNase C等在內的RNase；
- 兼容RT-qPCR應用體系：在投入量為20 U/T時對RT-qPCR檢測體系無影響；
- 兼容NGS應用體系：建庫產量及宿主DNA殘留優于進口品牌。
?
?
產品性能
?
0
1
E.coli基因組DNA殘留< 0.1 copies/100 U，顯著低于常規版本
?
?
對不同批次的UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)基因組DNA殘留檢測，并與常規Murine RNase inhibitor的宿主殘留水平對比，結果顯示UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)宿主基因組DNA殘留顯著低于顯著低于常規Murine RNase inhibitor。
?
圖2.UCF.ME??Swine RNase Inhibitor與常規版Murine RNase inhibitor中E.coli基因組殘留檢測結果對比
?
0
2
8U/T投入量能有效抑制50ng RNase A
?
?
以Total RNA為模板，配制RT-qPCR反應體系，驗證UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)消化RNaseA能力，結果表明UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)能有效抑制RNase A。
?
圖3.UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)對RNase抑制能力驗證
?
0
3
兼容RT-qPCR反應體系：在投入量為20 U/T時對RT-qPCR檢測體系無影響
?
?
以Total RNA為模板，配制RT-qPCR反應體系，驗證UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)對RT-qPCR擴增的抑制作用，結果表明UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)在投入量為20 U/T時對RT-qPCR檢測體系無影響。
?
圖4.UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)對RT-qPCR抑制作用驗證
?
0
4
兼容NGS應用體系：建庫產量及宿主DNA殘留優于進口品牌
?
?
UCF.ME??Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)搭配翌圣全能型逆轉錄酶Hifair??Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) (Cat#14604ES)應用于RNA建庫，建庫產量高于進口品牌T*，測序數據質量相當且宿主DNA殘留更低。
圖5.14675ES搭配14604ES應用于RNA-seq建庫產量
?
圖6.14675ES搭配14604ES應用于RNA-seq測序質量
?
?
?
?
參考文獻
Kobe, Bostjan, and Johann Deisenhofer. "Mechanism of ribonuclease inhibition by ribonuclease inhibitor protein based on the crystal structure of its complex with ribonuclease A."?Journal of molecular biology?264.5 (1996): 1028-1043.
?
?
?
翌圣ZymeEditor?酶改造定制服務
?
ZymeEditor?是一個創新型酶改造底層技術平臺，該平臺將理性設計技術與定向進化技術有機結合、交互篩選，為創新開發高端酶奠定了技術基礎，以滿足客戶對酶不斷升級的應用需求。目前該平臺已完成130余種高端酶的改造，具備扎實的酶改造技術基礎，為此，ZymeEditor?平臺對外開放了酶改造定制服務。若您有酶改造或生產的需求，快掃描下方二維碼聯系我們吧！
?
?
??手機號｜15180132598
?郵箱號｜luodan@yeasen.com