黑膠蟲污染統計，如有時間可將發生污染的血清牌子、型號、批號等詳細信息發我，統計結果大家共享（因跟操作步驟也有關，統計準確結果較難）我司只先做相關統計，有過污染的客戶請用酒精消毒所有相關器物，包括細胞培養箱。

用進口血清的實驗室注意，如自愿加入我公司細胞統計的可將細胞名錄中文英文（最好有圖片）列表發我，如直接從ATCC進口的請注明，我司統計后的結果會和大家共享統計結果。

20230926經12年相關案例統計，細工參考建議： 過關進口耗材試劑，很少有黑點，即便是保種級別試劑，操作生硬粗暴也會有黑點發生，可參考我們廣譜殺菌相關方法與操作。更多數據還需更多案例疑問與解決情況，疫情后國產試劑耗材眾多，細工建議用RAW264.7驗證參考有些意義。其他重點室特殊細胞培養，特殊手法需求及問題都可討論，我司優勢結合難養類肝、乳腺類、免疫懸浮類，腺類、上皮類等難點多重考慮給出建議參考。海歸老師提問問題非常重視，跟接近國外一流梯隊技術水平，老師多多提攜指正。我們不怕問題，更多問題才會出現更優產品。

20240923

 問題關于黑點

細工建議參考，用對試劑耗材（種子庫級別細胞不建議用便宜試劑，保種上百只種子細胞，也用不了多少錢的）胰酶輕柔處理（避免槍直接吹打細胞損傷也是較重要指標參數），幾代或十幾代后，黑點會全部消失。這個建議也只是救助辦法參考建議，經歷過黑點的細胞，建議重新保種國內正規庫來源細胞。

結合系生長慢參考

    細工建議參考 給出方案是進口瓶培養（康寧，nunc,德國產細工全部現貨） ，種子庫級別試劑（三千以上胎牛，我司驗證五年以上南美）我司培養基或者是GIBCO培養基，放足培養基（多些也沒關系）幾天不動，看下恢復情況，結合我司胰酶（無損消化）傳幾代應該能找回較好狀態，該方法也適合細胞養幾代后就爬爬這種情況（上述方法也適合細胞養傳代后細胞就爬爬這種情況，該因素原因很多，具體情況集體分析）該方法也建議原代首代培養（類器官）就是普通培養基加胎牛（因子貴，lag phase長、無血清不穩點）全部能替代，細胞夠多或穩定后在上無血清可做參考。類器官配套耗材U型低（不加輔助條件成球）及磁珠配套磁力成球可來信告知索取資料及技術討論。郵件聯系

上述思路解決要順利，來信告知，目前統計進口試劑耗材成功案例，有細胞生長慢，黑點案例都誤認為是支原體，合作實驗室比較熟悉培養體系，應用后，任何問題都沒有，就是復蘇初期老師比較心急，沒按正常傳代后，皿居多，三天以上后，pH變化較快，影響了后面生長。如驗證，到任何問題難點都可來信討論。如有理想趨勢生長，胰酶建議用0.05或者我司胰酶（上皮類成片解決要柔和，常規0.25濃度容易消化成細胞泥，膜損傷厲害，對細胞損傷很大，影響救助） 

我們會統計更多難點應用有

成瘤不理想細胞株

耐藥株復蘇救助

細胞養幾代后就爬爬這種情況

該理由來自類器官培養統計，及下面各類難養株常年統計，下面內容有需要的可來信告知。我發您，要有針對的痛點難點，我們會補充更多資料。

救助細胞系建議來源國內正規庫，公司來源差很多。如照顧我司生意長期訂購試劑，我們可送國內庫同類細胞株做獎勵，我司今年試劑所有原料都是臨床原料級別。能到種子庫級別。

相關救助方案我們會一直優化沒更多好消息發您，還想問題下干細胞培養老師，您用的培養體系二氧化碳是否有控制，是否是2%，還是5%二氧化碳。如果用EDTA消化，建議用我們優化胰酶可能細胞會更好（我們胰酶對細胞膜無損，可發試用）長期干細胞培養治療相關，可長期討論更多應用。我們后面也做重點科研討論，

20231103

常見問題關于黑點

細工建議參考，用對試劑耗材（種子庫級別細胞不建議用便宜試劑，保種上百只種子細胞，也用不了多少錢的）胰酶輕柔處理（避免槍直接吹打細胞損傷也是較重要指標參數），幾代或十幾代后，黑點會全部消失。這個建議也只是救助辦法參考建議，經歷過黑點的細胞，建議重新保種國內正規庫來源細胞。

問題細胞系生長慢-原代生長慢-細胞養幾代后就爬爬這種情況
細工建議參考 給出方案是進口瓶培養（康寧，nunc,德國產細工全部現貨） ，種子庫級別試劑（三千以上胎牛，我司驗證五年以上南美）我司培養基或者是GIBCO培養基，放足培養基（多些也沒關系）幾天不動，看下恢復情況，結合我司胰酶（無損消化）傳幾代應該能找回較好狀態，該方法也適合細胞養幾代后就爬爬這種情況（上述方法也適合細胞養傳代后細胞就爬爬這種情況，該因素原因很多，具體情況集體分析）該方法也建議原代首代培養（類器官）就是普通培養基加胎牛（因子貴，lag phase長、無血清不穩點）全部能替代，細胞夠多或穩定后在上無血清可做參考。類器官配套耗材U型低（不加輔助條件成球）及磁珠配套磁力成球可來信告知索取資料及技術討論。郵件聯系

氣泡培養伴隨細節處：預判自動化培養關鍵點
吸液按到底，很多會忽略。大部分問題可解決，
上述問題細工統計解決問題比較順利，大部分也沒有常規判斷的支原體等問題。23年解決幾個案例非常成功。

成瘤不穩定組參考，首發少數技術老師參考
瓶，慢養慢傳代慢生長，無損胰酶，少二氧化碳，減緩生長，減緩分化，理由：來自成干成球培養，難養細胞株痛點統計規律相似特點。分出一批評測，操作更簡單，給成瘤不穩定組，提供一組備份條件，從成干特點上看，優勢挺大的，也給出一套備份技術儲備。
提醒：這類問題如有，培養部分上述注意外，種子來源非常重要，如是長期課題，種子建議國內正規庫重新訂購，并把試劑耗材部分盡量于正規庫一致，一組，上述瓶并減二氧化碳一組，成干厭氧培養可查減緩細胞分化（理由一組救治培養,千萬別圖塊）
細胞接種成瘤不穩定痛點咨詢，來自北京一些實驗室成瘤問題普遍降低，我們給出些參考，應用還不多，還在統計中，慢培養是一個因素，還有一個是缺氧培養，查了些資料，昆明海拔一千以上，能否從您那得到些細胞系培養與海拔較低地區，北京，上海，廣州地區常規培養是否有生長慢特性，特點，后面這個驗證順利，還考慮總結合作更高海拔培養特點，寧夏西藏，高海拔總結統計還沒開始。

20241119

自動化培養冗余試劑開發案例介紹-黑點、生長慢解決思路方法參考
問：
想請教一下各位老師，圖里的是293t細胞，紅框標識的地方細胞內有小黑點，而且會動，請問這可能是什么，有什么處理方案嗎；當前嘗試使用左氧當作支原體處理，目前看來無效？
就是懷疑細胞里面的黑點是某種胞內微生物污染
準備檢測一下

答：
黑點討論：用瓶用皿，生長時間多久，胰酶濃度可低些，提高血清濃度，換成瓶進口的，恢復下，養幾天試試，要是生長時間長，上述很管用，血清廠家貨號，培養基效期列出下，要是時間太長，補谷氨酰胺，或換成叫新批次，按上述做下，如有條件換成大牌子進口的，養幾代會有改觀。如有效果來信告知。我們統計黑點，生長慢問題

黑點發生，培養液不新鮮，血清營養含量不夠，生長慢后，皿容易PH變化大，導致越來PH變化越大，過酸或過堿，瓶能改善，并能恢復，參考。我覺得檢測意義不大，上述要列出來，問題就能很快排除，培養基都差不多，后面要長養細胞，叫新鮮要對廠家說出來，或者自己有補救辦法。說的不對處請海涵。

驗證后，再出現黑點問題，能很快排除，目前幾個組按上述驗證，用戶還比較滿意。

低濃度胰酶，0.05是個好習慣，消化時間雖然長些，膜無損更重要，正規庫幾個老技術都推薦，也不反駁同學用，0.25我們做自動化培養冗余試劑開發，胰酶濃度很關鍵。

0.25消化后的細胞，傳代后會先恢復細胞膜在生長，細胞工廠大面積消化，我們有統計，還有就是成團成片類特性細胞，0.25容易把外面消化成泥，里面也沒消化透 ，并伴隨細胞老幼狀態，上皮類團聚尤甚，293就是上皮類案例，老幼情況出現，細胞狀態不一，難做后面實驗，參考

避免建議，小克隆形成后，就用低濃度胰酶，消化成單個傳代，大面積在消化，老幼問題用以出現，案例細胞，mdck

注：生長慢同理處理，疑問處可討論痛點。經上述問題長期統計，黑點影響因素參考：培養基新鮮度（谷氨酰胺降解沒發揮作用），血清營養程度（影響增殖生長），胰酶損傷程度（影響細胞膜完整）。通過問題驗證試劑篩選推薦。上述針對細胞系含血清方案。原代無血清，建議含血清先摸出最優生長條件（2020年類器官相關統計）原代較好條件，上述處理步驟理解應用后，4-7天就會傳代長滿，培養時間太長，是培養條件不合適，所以建議含血清先行，大量細胞培養后，在上無血清相對容易。細節處告知詳情討論。建系目的標注清楚，我們推薦配套試劑，方法。

總結：類器官、人造肉、自動化培養、建系、微流控制培養等應用，長久看，各種培養中問題都要解決或者有突破，細工生物在這方面，根據自己能力財力，推薦含血清方案為主(容易實現，也是無血清培養條件驗證大量細胞拿到驗證前提，即便是臨床研究應用目的，細胞量也是摸無血清培養條件前提)目前國內已有公司推出把類器官培養100培養工作一天完成成瘤成球，延展討論以下體系培養中問題統計(涉及統計內容較多，有需要可留郵箱）。

20241127

冗余試劑開發需給設備、技術、細胞、水試劑、操作方法多方位融合，可行性高，基礎實驗要能順利完成（解決痛點難點）或者提出可行性參考建系，國內五百家實驗室，十年細胞培養問題統計，以最常見293案例，開始更多數據技術共享及自動化培養應用中統計開始，近五年細胞工廠應用，配合現在自動化培養、微流控制培養、細胞力學研究一些問題統計，統計更多自動化細胞培養中問題，建系目的，中式工業應用目的，簡單易行思路。

以黑點，生長慢，提出細工方案參考，

需長期深入討論，標注下，為討論溝通精準性，建議告知詳細資料需：

細胞來源，公司，正規庫，等

耗材廠家貨號

試劑廠家貨號

細胞圖片，增長描述，問題描述，實驗理想目的。

珍貴株需救助的，對自動化培養有積極意義，討論溝通標注下，我們最有興趣的案例細胞，我們目的是建系，痛點難點問題更有興趣，效果明顯，成就感也大。

陸續后面會推出，簡易單克隆可行性（國內建系為主），凍存復蘇挑剔細胞（原代尤甚），自動化轉染試劑開發、耐藥株建立，缺氧培養是救助不成瘤主要思路（延展工業應用數據儲備歡迎合作開發-工業戶）相關資料都會發上來。

20241230

細胞層面質量提升是最重要上述總結，在以下研究都能通過超長維持培養，同一質量優勢明顯，人源化模型、細胞之間互作用、蛋白互作用、基因研究互作用、類器官互作用、線粒體互作用。工業生產等
培養中痛點統計，也是我司開發冗余試劑優勢所在，對接自動化培養設備生產商，微流控制芯片設備細胞培養商，對接一線科研工作者，順便人才儲備與應用中問題統計。

20250507

三伏天污染一起驗證疑似污染細胞排除建議-長期討論
1：建議換季整體衛生掃除習慣
2：培養箱底座水盤需勤換，北京地區兩臺培養箱的，有需要一起驗證的解決辦法的來信告知，
疑問細胞建議驗證
分出一瓶，含血清二維養，高質量培養瓶，多放些完全培養基，幾天后恢復生長，可考慮排除污染問題。細胞系，原代，3D培養都適合
要沒問題，可以考慮代謝盡了造成的（特別是無血清）生長五天以上。
上述救過幾個細胞系，不是污染問題，正好三伏天到來季一起驗證方法可行性，營養耗盡了引起的，皿培養的pH變化快引起的，都可通過上述調整過來。
我準備用銅片（氯化銅液體也可以）放水箱里看看有無效果，避免三伏天污染情況。二十年前培養箱有銅體培養內膽，2015年大廠家培養箱推出過銅內膽箱體，當時沒統計?，F在開始每年三伏天開始統計方法可行性，自動化培養相關技術儲備。

有興趣組，建議詳細討論溝通，細胞名稱，試劑耗材廠家型號，生長特點，目的要求。

20251023

自動化培養去除黑點問題有同路老師嗎

黑點問題：該項問題作為水試劑生產商常會遇到的問題，大部分老師會放棄細胞，換新細胞。該問題國外很少，國內實驗室多是一個因素，試劑人員技術等遷就因素匯總，我司十幾年統計，目的是要建自己的系，所以需更深入了解關鍵因素，結合難養系（這類一超長時間培養，維持培養）這類問題就頻發，換成種子庫級別試劑，結合實戰，問題可順利解決（國內實驗室用到種子庫級別成本較高，建議正規庫來源細胞做技術儲備，我司可對接這類細胞，問題痛點準確并重復一致），結合自動化培養方面研發，該類問題可通過成像識別與算法結合，自動化可區分，細胞膜厚度，形態，消化快慢等，區分出不同組，分別培養，就能養出差別組，成像識別與計算機算法我們不懂，目前只能涉及到這步了，現在描述簡單，真驗證需要資金，時間等，都是可觀的難題與痛點。我們從手動加案例已能排除該類問題，如您公司研發涉及到該點，可深入討論可行性。舉例目的是前面提到的各種問題都是這個思路，因該方向屬于基礎中的基礎，同路較少，也只能說到這里了。其他對應的問題都適合參考。

預判：一兩年后自動化培養躲不開我列的這幾個問題：黑點，生長慢，不成瘤細胞優化，污染去除，變形修復，轉染死細胞過多（相關試劑開發，遞送產品開發）凍存復蘇死細胞過多（相關試劑開發，技術儲備）這幾項也是自建系，耐藥株等高級實驗會遇到的痛點。有相關技術討論可來信，這幾項都可開發自動化培養-冗余試劑-技術儲備（關鍵點，團聚，成片，堆疊，sv40,上皮，含血清，無血清，酶裂解，促錨著，單細胞，凍存復蘇）
轉化拓展應用：最終開發相關技術產品后，系統跑出純國內技術含量，細胞系，為科研，蛋白生產，蛋白藥應用拿出可行方案，我們只做水試劑生產，冗余試劑配套。整套黑點去除自動化培養方案，包含上述開發產品所有難點痛點。無用之用。

20260330

建系組保種參考-離體后馴化培養習慣與建系成功后優化培養種子庫參考
通過近幾年類器官相關問題統計，與前期國內庫來源難養系類統計，就目前國內建系組就離體后培養與建系后馴化培養與保種建議參考。

離體后處理與培養，普通培養體系也可很順利培養，增殖速度上會慢些，正常組織細胞會很順利增殖，癌部份增殖較慢，建系目的細胞如用流式，或單細胞測序等方法，建議先簡易單克隆保種后，分出多余細胞做鑒定，種子目的細胞不要有化學力，機械力等實驗損傷。需簡易單克隆組-郵件聯系

種子細胞鑒定后細胞增殖馴化，建議用平時篩選較嚴格培養體系，通過馴化與簡易單克隆方式，反復優化馴化培養，提高增殖速度，雖然也費時，目的結果可控。

污染后救助建議ATCC方法，一周左右防止去除，國內合作庫案例推薦。

轉染與感染：建系需高滴度蛋白與病毒，可討論細工工具細胞應用參考，低毒轉染試劑開發可討論-細工開發自動化轉染冗余試劑部份。

凍存復蘇-細工這部分總結敏感凍存復蘇案例較多，原代凍存復蘇相關試劑與技術方法一致在統計中，臨檢樣本庫-PBMC,單細胞測序用戶組已有多年合作與案例應用，臨檢組原代細胞培養更多統計與試劑、技術方案國內體系備份組也在進行中，有需案例驗證預實驗組，可先討論細工方案可行性。
注：離體培養與建系后馴化分開看，細工結合售后統計資料，經驗等，給出簡易可行救助方案。