1：復蘇后首代死細胞過多。原代，系雖然問題特點有差別，量化應用統計目的高細胞活率目的一致，推薦含血清方案DMSO,5-10%+FBS,40-90%,程序降溫泡沫盒+棉花包裹后，每分鐘梯度降溫0.4-0.6度，天然高質量胎牛在零-負二十度程序降溫對細胞保護明顯，臨床組原代免疫細胞活率大于90%,建議上述方法加入種子庫級別試劑評測，建議與血替產品差別評價方法推薦。種子庫，臨床免疫細胞原代，各種難養系系驗證較準確。驗證預實驗結果為準并長時間評測。
2：痛點成團成片，團聚類：難養系，原代，肝類，胰島胰腺類，腺類，神經類，免疫類，耐藥株，SV40,上皮類，都有易成團成片特性，這類細胞還推薦上清回輸方法作為輔助救治細胞培養條件（難養系，原代，免疫類系原代，乳腺，前列腺,膠質類），也是無血清容易出現的狀態，
3：二甲基亞砜敏感，解凍后應立即去除冷凍保護劑，在9-10毫升完整的完全培養基溶液中進行緩慢離心（125×g，10分鐘）特別是難養系都建議不增殖情況下。

凍存復蘇挑剔參考
耐藥株建立后高活率要求細工備份方案
原代免疫-臨床研究高活率細工方案優勢
原代自建系保種
二倍體細胞系
工業案例馬利克疫苗-對凍存復蘇技術
種子庫應用需長時間反復驗證，備份組預驗證，其他特殊目的或更多優化方法可討論
上述有開發凍存復蘇自動化用戶組，溫控可檢測0.4-0.6的廠家可留言，統計討論應用中問題。

凍存復蘇后培養過程中死細胞伴隨推薦備份方案
1：常見問題，因增殖慢，習慣培養長時間少動（容易導致細胞質量老幼并存，凍存復蘇后死細胞過多，轉染后死細胞過多也是同理）建議小克隆形成后及時消化成單個后鋪板傳代，該步預實驗驗證后，轉染，凍存復蘇首代死細胞問題都有明顯改善，
2： 優化胰酶，對細胞膜無損，上述難養類保證細胞膜完整也是培養重要組成部分，并胰酶敏感類都有多年統計案例與應用。無血清方案因子營養耗盡影響狀態及問題，建議含血清先行驗證。
3：避免老幼并存，種子庫更新推薦細工簡易單克隆法是個不錯的方法，延展應用，原代單細胞研究，單克隆目的細胞，
4：系應用目的推薦，離體處理推薦無外力（機械，化學），簡易單克隆后，大量培養培養后在做流式鑒定，避免化學力影響增殖，含血清培養可行性高（黑點，生長慢）都可用含血清方案作為備份方案。大部分類器官無血清方案都有這類問題，含血清有提升細胞質量，并修復，預實驗備份驗證先行。適合類器官黑點，生長慢作為補充條件一，條件二推薦上清回輸培養。