腺病毒（Ad）載體是最常用的癌癥基因治療載體，其中Ad5(adenovirus serotypes 5)型的載體被廣泛用做基因遞送載體。Ad 基因治療顯示出良好的抗腫瘤活性和免疫耐受性，因此，在臨床試驗中使用腺病毒的數量不斷增加。
腺病毒的基本結構
一種無外殼的雙鏈DNA病毒，基因組長約36kb
衣殼呈規則的20面體結構，直徑約80~110nm
衣殼含有240個六聯體、12個五鄰體及12根纖毛，還含有一些小蛋白，如VI、VIII、IX、IIIa和IVa2。五鄰體及纖毛的頭節區可與細胞表面的受體結合，在病毒感染細胞過程中起著非常重要的作用。
腺病毒載體
市面上常見的腺病毒是基于AD5型腺病毒的基因組結構缺失E1區或者E1&E3區。E1區的缺失導致腺病毒載體不能復制，E1基因的缺失可在包裝細胞HEK293（HEK 293細胞系表達E1蛋白）中得到補充。
選擇適合的病毒載體
病毒載體的表達時間與實驗觀察時間是否相符
病毒載體可以容納的片段大小與目的基因大小是否契合
病毒載體對目的細胞、在體組織的轉導是否足夠高效。
通?？蛻糇鲶w外細胞感染的話，大概率用慢病毒；如果要做穩轉株，那就只能選慢病毒。
體內感染的話，大概率用AAV；
如果只是要短時間表達 那么可以嘗試腺病毒；原代細胞、新生鼠、體內瘤體感染的話，大概率用腺病毒。
腺病毒作為基因遞送載體
優勢：
A 宿主范圍廣, 對人致病性低
腺病毒能感染幾乎所有的細胞類型，除了一些抗腺病毒感染的淋巴瘤細胞。腺病毒載體系統可廣泛感染一系列哺乳動物細胞，也是研究原代非增殖細胞基因表達的最佳系統，它可以使轉化細胞和原代細胞中得到的結果直接進行對比。
B 能有效進行增殖，滴度高
腺病毒系統可產生1010到1011VP/ml，濃縮后可達1012~13VP/ml，這一特點使它非常適用于基因治療。
C 不整合到染色體中，無插入致突變性
逆轉錄病毒可隨機整合到宿主染色體，導致基因失活或激活癌基因。而腺病毒則除了卵細胞以外幾乎在所有已知細胞中都不整合到染色體中，因此不會干擾其它的宿主基因，適合基因瞬時表達。
而在卵細胞中整合單拷貝病毒則是產生具有特定特征的轉基因動物的一個較好的系統。
D 能在懸浮培養液中擴增
腺病毒易于擴增，而其他病毒比如慢病毒和腺相關病毒需要重新包裝。293細胞可以適應懸浮培養，這一調整可使病毒大量擴增。
E 能同時表達多個基因
可以將含有兩個基因的雙表達盒插入腺病毒轉移載體中，或者用不同的重組病毒共轉染目的細胞株來分別表達一個蛋白。
劣勢：
a. 不能長期表達；
b. 高免疫原性，特別是在高劑量的情況下可能帶來嚴重的毒性反應；
正是由于具有以上優點，腺病毒被極其廣泛地應用于體外基因轉導、體內接種疫苗和基因治療等各個領域。
腺病毒常見問題解惑
腺病毒感染后檢測時間
檢測時間-體外細胞：腺病毒可在感染后48h檢測；檢測時間-體內細胞：腺病毒一般在病毒注射后2~4天檢測；
熒光會在細胞持續多久
慢病毒熒光不隨著細胞分裂傳代而丟失；
腺病毒感染細胞后，在大部分細胞中，腺病毒可維持 7-14 天的表達時間；
AAV主要用于動物實驗，熒光可維持大概3~6個月以上
關于抗性
腺病毒一般沒有帶抗性的載體，因為腺病毒表達時間短，一般不能用于抗性篩選。
E1、E3基因
腺病毒常規都沒有保留E1、E3；E1為與復制能力相關的基因，E3為與致病性相關的基因。
溶瘤腺病毒保留了E3，E3區是在輔助質粒上，E3區的刪除不影響病毒的復制，E3跟毒性有關。
為什么腫瘤適合用腺病毒
腺病毒具有嗜上皮細胞性，而人類的大多數的腫瘤就是上皮細胞來源的。
病毒于腫瘤細胞的選擇性復制
通過特異性的腫瘤組織啟動子來控制病毒增殖必需基因的表達來獲得。將腫瘤組織特異性啟動子（TSP）取代E1A基因自身的啟動子，使其只能在腫瘤細胞內表達，而在正常細胞內處于低表達或者不表達。
腫瘤特異性啟動子分類
廣譜性腫瘤特異性的啟動子：在所有的腫瘤細胞中表達，如survivin 啟動子、環氧化酶(COX-2) 啟動子、hTERT 啟動子。
針對特定腫瘤的啟動子：僅在特定腫瘤細胞表達，如：前列腺特異性抗原（PSA）啟動子，甲胎蛋白（AFP）肝癌啟動子，癌胚抗原（CEA）上皮癌啟動子。
動物實驗病毒注射
病毒注射方式是一樣的，如果是非分裂的細胞，腺病毒需要每隔七天注射一次；慢病毒是整合型的，一次注射長期表達；aav是伴隨性病毒，只需要注射一次，可能長期表達。
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