且慢,作為一只百折不撓的科研汪,怎能輕言放棄?本汪憑借多年積累的搜索技巧,發現想要了解流式檢測,首先可從以下幾個方面著手:
一、樣品制備
樣品制備是影響流式檢測分析結果是否準確的關鍵因素之一。對于流式檢測,必須要制備單細胞懸液。在處理不同組織時,應盡可能采用對細胞損傷小、產率較高的單細胞懸液制備方法,最大限度地保持原有細胞特性。另外,流式檢測的樣品必須是新鮮采集的,液氮冷凍保存或固定處理后的樣品都不能用于流式檢測分析。
二、熒光素選擇
常見的熒光素種類有 FITC(異硫 qing 酸熒光素)、PE(藻紅蛋白熒光素)、APC(藻青蛋白熒光素)、PerCP(多甲藻葉綠素蛋白熒光素)以及 Alexa Fluor 系列等。其中最常用的是 FITC,該熒光素較為穩定,由 488m 激光器激發,其發射的熒光信號被第一熒光通道(FL1)接收。PE 也是由 488nm 激光器激發,發射的熒光信號被第二熒光通道(FL2)接收,其熒光信號較強,是 FITC 的 30-100 倍,適用于對弱表達的抗原分子的分析。APC 卻是由 635nm 激光器激發,故 488nm 單激光器的流式細胞儀無法分析 APC 的熒光信號。
三、補償調節
做單色分析時,不需要熒光補償。但是,當樣品用 2 色以上熒光染色時,由于不同熒光素光譜之間存在著互相交疊現象,每一個熒光素在某種程度上都會在「錯誤」的檢測器上顯示出信號,為消除這種影響,就需要做熒光補償。
只知道以上幾點,對于流式檢測是遠遠不夠的,所以,還要從專業人員那里吸取寶貴的經驗。這不,義翹神州將于 2019 年 5 月 16 日 14:00 舉辦在線講座《流式細胞術實驗精要及其在癌癥研究中的應用》,想要早點「愛」上流式的童鞋,點擊右側報名鏈接,快來報名吧~
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