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Streptavidin鏈霉親和素系列專題

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2022-07-19T13:46 (訪問量:1268)

Streptavidin鏈霉親和素系列專題

—— 一品多用,實(shí)現(xiàn)價(jià)值

一 背景介紹


鏈霉親和素是一種來源于阿維丁鏈霉菌(streptomyces avidinii)的生物素結(jié)合蛋白質(zhì),其非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低,且與蛋清親和素在中性pH值具有凈正電荷和包含大約7%的碳水化合物相比,鏈霉親和素蛋白具有在中性pH值幾乎沒有凈電荷,不含有碳水化合物等更有利的化學(xué)性質(zhì),所以它被廣泛用來作為抗生物素蛋白的替代品。

二 產(chǎn)品特點(diǎn)


? 四聚體結(jié)構(gòu):鏈霉親和素同源四聚體的形式存在,大小為66Kda

? 親和力強(qiáng):分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合,兩者之間的親和力極為強(qiáng)烈

? 用途廣:鏈霉親和素-生物素復(fù)合物的解離常數(shù)處于 10 mol/L 數(shù)量級(jí),這一性質(zhì)常用于分子生物學(xué)用途;在大多數(shù)應(yīng)用中,可以與抗生素蛋白抗體相互替代。

? 優(yōu)質(zhì)提取:streptomyces avidinii菌提純獲得;

圖片2.png

圖1鏈霉親和素

三 產(chǎn)品應(yīng)用

應(yīng)用一 鏈霉親和素純化樹脂

1 應(yīng)用原理

基于鏈霉親和素與生物素之間的相互作用,將鏈霉親和素高度交聯(lián)于6%瓊脂糖上,獨(dú)特的制備工藝使其具有更高的物理化學(xué)特性,可以耐受更高的壓力,在相對(duì)較高的流速下,實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化,更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。

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圖2 鏈霉親和素樹脂的純化原理

2 Yeasen致力于為您提供效率高的產(chǎn)品,為您純化得到更完美的蛋白。

圖片4.png

圖3 鏈霉親和素樹脂純化后的蛋白

3 常見問題

問題

可能原因

推薦解決方案

柱子反壓過高

填料被堵塞

清洗樹脂。

裂解液中含有微小的固體顆粒,建議上樣前最好用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾,或離心去除。

樣品太黏稠

樣品中含高濃度的核酸,延長破碎時(shí)間直至粘度降低,或添加DNaseI (終濃度為5μg/ml),Mg2+(終濃度1mM),冰上孵育10-15min

緩沖液太黏稠

有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑(如甘油等)可能會(huì)引起反壓增高,降低操作流速。

洗脫組分中無目的蛋白

過度的裂解使目的蛋白變性

使用溫和的裂解條件,實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。

目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀

在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT,終濃度為1-10 mM

目的蛋白沒有完全洗脫下來

洗脫體積太少

增加洗脫液體積,減小洗脫流速。

洗脫液中鹽酸胍的pH 發(fā)生改變

使用新鮮配制的洗脫液

洗脫液孵育時(shí)間不夠

增加洗脫液與凝膠的孵育時(shí)間

應(yīng)用二 熒光基團(tuán)及酶偶聯(lián)物標(biāo)記的鏈霉親和素

圖片5.png

圖4 不同標(biāo)記的鏈霉親和素

1 酶偶聯(lián)物標(biāo)記的鏈霉親和素

辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈和親霉素

1) 由高純度的鏈霉親和素和辣根過氧化物酶,通過特殊的偶聯(lián)技術(shù)生產(chǎn);

2) 保持了過氧化物酶的高比活性。

應(yīng)用于免疫組化(IHC免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC原位雜交(ISH等領(lǐng)域。

推薦使用濃度0.01-0.1 μg/mL for WB(化學(xué)發(fā)光法);1-2μg/mL for ELISAHC/ICCWB(底物顯色)

堿性磷酸酶標(biāo)記鏈霉親和素

1) 適合于固相分析,組織/細(xì)胞染色系統(tǒng)和印跡應(yīng)用,選擇特定的共價(jià)連接;

2) 綴合物穩(wěn)定并高活性。

應(yīng)用于免疫組化(IHC免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA原位雜交(ISH印跡應(yīng)用

推薦使用濃度1-2 μg/mL for ELISA IHC/ICC0.1-1 μg/mL for WB

2 熒光基團(tuán)標(biāo)記的鏈霉親和素

Fluor?熒光素標(biāo)記鏈霉親和素

1) 推薦用于常規(guī)免疫熒光;

2) 高度純化并具有非常低的非特異性結(jié)合特性;

3) 對(duì)生物素具有較高的親和力;

應(yīng)用于免疫熒光(IF原位雜交(ISH流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cyt

推薦使用濃度0.5-2 μg/mL(IF

DyLight? 染料標(biāo)記鏈霉親和素

1) 在免疫熒光、原位雜交或流式細(xì)胞術(shù)等應(yīng)用中可用于檢測(cè)生物素化的二抗和其他大分子;

2) 高度純化并具有非常低的非特異性結(jié)合特性;

3) 對(duì)生物素具有極高的親和力;

4) 高光穩(wěn)定性、pH不敏和更亮的熒光;

應(yīng)用于免疫熒光(IF原位雜交(ISH流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cyt

推薦使用濃度0.5-2 μg/mL(IF

四 產(chǎn)品信息

翌圣生物科技(上海)股份有限公司 商家主頁

地 址: 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄一號(hào)樓三層南單元

聯(lián)系人: 李自轉(zhuǎn)

電 話: 400-6111-883、021-34615995-8075

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