雜交瘤細胞由能分泌特異性抗體的致敏B淋巴細胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞融合而成，再經次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷的篩選及克隆化可以得到大量單克隆細胞株，能分泌針對一種抗原表位的特異性抗體，即單克隆抗體。

雜交瘤單克隆抗體制備流程

利用雜交瘤技術制備單克隆抗體的一般流程為：抗原制備、動物免疫、細胞融合、雜交瘤細胞的選擇性培養、雜交瘤細胞的篩選及克隆化、單克隆抗體的鑒定、雜交瘤細胞的凍存、單克隆抗體的大量生產、純化。

雜交瘤單克隆抗體制備常見問題

1.HAT培養基篩選雜交瘤細胞的原理？

HAT選擇性培養基是在普通培養液中加入次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷。正常骨髓瘤細胞是次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶（HGPRT）缺陷型，不能夠利用補償途徑合成DNA，而雜交瘤細胞具有B細胞的補償途徑，能在HAT培養基中存活增殖，因此用HAT培養基篩選雜交瘤細胞。

2.二次篩選有何意義？該怎么進行呢？

HAT培養基篩選的僅是雜交瘤細胞，在特異性方面可能存在差異，僅有少數是分泌預定特異性抗體的細胞，因此需要進行二次篩選。通常采用有限稀釋克隆細胞的方法，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔的細胞培養板上，使每一孔含有一個或幾個雜交瘤細胞，這些單細胞克隆生長，選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養。因此，在單克隆抗體制備過程中，需要經過兩次原理和方法不同的篩選過程。

3.融合前，為何要進行骨髓瘤細胞的篩選？

融合前，應用含8-AG（即8-氮鳥嘌呤）的培養基對骨髓瘤細胞進行篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT活性。HGPRT是補償途徑嘌呤的主要合成酶，8-AG可以作為合成DNA的原料，但由于它是一種堿性細胞殺傷因子，對細胞有毒，其存在會使細胞死亡。而HGPRT缺陷的骨髓瘤細胞不能通過補償途徑合成DNA，故可以存活，因而經8-AG篩選后的細胞都是HGPRT酶缺陷株。

4.克隆化的時間選擇？

克隆化是為了獲得產生預定抗體的單一細胞系，常用的方法為有限稀釋法?？寺』瘧M早進行并反復篩選，但也不宜過早，太早雜交瘤細胞性狀不穩定，數量少且有丟失染色體的傾向；太晚各種細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養及空間，目的細胞可能被其他細胞淹沒并淘汰?？寺』年栃噪s交瘤細胞，經過一段時間培養后，可能會因細胞突變或染色體丟失，使部分細胞失去產生抗體的能力，所以需要進行多次克隆化。

5.細胞融合需要注意什么？

污染是融合實驗最大的失敗原因，干凈的環境及適宜的無菌操作技術是融合成功的關鍵；技術上的誤差也常常會導致融合失敗。如供者淋巴細胞無免疫應答等。

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