?DN**段化代表晚期細胞凋亡的特征。凋亡細胞中的DNA斷裂可以通過末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）介導的dUTP缺口末端標記（TUNEL）檢測。?適用于熒光酶標儀，熒光顯微鏡或流式細胞儀。在流行的FITC通道上可以輕松檢測到其信號。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Cell Meter TUNEL凋亡檢測試劑盒。
光譜：
適用儀器
流式細胞儀
Ex:488 nm
Em：530/30? nm?
通道:FITC通道
?熒光顯微鏡
Ex:FITC?濾波片組
Em：FITC?濾波片組
推薦孔板:黑色透明底板
熒光酶標儀
Ex:490 nm
Em：520 nm
Cutoff：510 nm
推薦孔板:黑色透明底板
讀取模式：底讀模式
實驗方案
樣品實驗方案
簡要概述
1.?用測試化合物準備細胞。
2.?與TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分鐘至1小時。
3.?洗滌細胞。
4.?用4％甲醛（可選）固定細胞。
5.?用帶FITC濾光片的熒光顯微鏡或帶FITC通道的流式細胞儀。讀取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）處的熒光強度。
溶液配制?
工作溶液配制
將0.5μL的100X Tunnelyte Green（組分A）添加到50μL的反應緩沖液（組分B）中，使總體積為50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意：應單獨評估每個細胞系，以確定細胞密度。
實驗步驟
1.根據您的特定協議，將細胞培養至密度以誘導凋亡。 對于在96孔板培養物中生長的貼壁細胞，我們建議大約30,000至50,000個細胞/孔，對于非貼壁細胞，建議大約1至2 x 106細胞/ mL。 同時，在每種標記條件下，用誘導群體相同的密度培養非誘導陰性對照細胞群體。 注意：我們用100 nM-1 μM星形孢菌素處理HeLa細胞4小時，以誘導細胞凋亡。
2.染色和固色：
2.1取出細胞培養基。
2.2向每個樣品中添加50μL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分鐘。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 μL /孔的PBS洗滌細胞1-2次。
2.5向每個樣品中添加100uL反應緩沖液（組分B）。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的熒光酶標儀，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有FITC通道的流式細胞儀檢測熒光強度。
2.7可選：從步驟5中移出反應緩沖液，并向每個孔中添加100 μL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定緩沖液（未提供）。注意：對于非貼壁細胞，請添加所需量（例如2X106細胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室溫下將平板孵育20至30分鐘。
2.9去除固定劑。
2.10用PBS洗滌細胞2-3次，并用100μL PBS /孔/ 96孔板替換。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的熒光酶標儀，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有FITC通道的流式細胞儀檢測熒光強度。
2.12可選：用1X Hoechst（組分C）在Ex / Em = 350/460 nm處染色細胞核，以進行圖像分析
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圖中所示。在海拉細胞TUNEL反應的熒光圖像100海里的治療或1μM staurosporine (SS) 4小時與未經處理的控制。與TUNEL細胞孵化工作解決方案1小時在37oC。分析了綠色熒光信號使用熒光顯微鏡和FITC過濾設置。熒光標記DNA鏈斷裂顯示強烈的熒光染色法在SS細胞治療。