基質膠應用(5)-使用技巧全揭秘-技術前沿-資訊-生物在線

基質膠應用(5)-使用技巧全揭秘

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2025-07-28T00:00 (訪問量:48414)

01

前 言

基質膠是3D細胞培養、類器官、成瘤、侵襲、血管生成等實驗的“萬能支架”。然而,從解凍到鋪板,從濃度選擇到結果判讀,稍不留神就可能“翻車”。翌圣生物結合上萬次實驗反饋,整理出這份“避坑指南”,助你一次上手,穩拿高分數據。

02

到貨 & 儲存

問題

翌圣建議

收到貨后如何保存?

將本產品置于-20℃環境存放;若短暫放置,4 ℃不超過7天。

能否反復凍融?

不建議反復凍融;首次融化后立即分裝(200 µL/管),-20 ℃保存。

如何進行融化?

冷凍狀態的基質膠可以在操作前一天埋藏于碎冰中,再轉移入4 ℃冰箱,次日即可使用。適當延長4℃融化時間可以有效減少基質膠中的氣泡。

03

顏色/濃度怎么選?

類型

特點

適用場景

含酚紅

pH指示

常規實驗都可以使用含酚紅產品,由于酚紅存在時,在溫度、pH不同的情況下液體會出現顏色的差異,顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化。

無酚紅

無顏色干擾

涉及顏色檢測的實驗,推薦使用不含酚紅的基質膠,如對子宮內膜細胞培養必須使用不含酚紅的基質膠。此外,酚紅是一種潛在的內分泌干擾物,有可能會干擾實驗動物體內激素的自然產生和代謝能力。

標準濃度

蛋白濃度:8 - 12 mg/mL

Transwell實驗、皮下成瘤實驗

高濃度

蛋白濃度:18 - 22 mg/mL,凝膠3-5 min

皮下成瘤中較難成瘤的細胞系

低生長因子

標準濃度基質膠的基礎上做了減生長因子處理

類器官培養、血管生成

04

實驗細節

場景

高頻問題

解決錦囊

皮下成瘤

荷瘤不成功可能的原因

取處于對數生長期的細胞,細胞達 80 - 90% 左右密度為宜

選擇 4 - 6 周齡裸鼠,小于 4 周可能不耐受過早死亡,大于 6 周免疫力會增強,不易成瘤。

可能是小鼠免疫排斥,建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠

可以在接種后一周補種1次,可以很好的提高成功率

腫瘤長起來后又消失的原因

很可能是由于炎癥反應,腫瘤細胞被小鼠自身吸收造成的。若后續腫瘤依舊未長出來,可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠。

血管生成

成管實驗中細胞 不能形成連續的網格

建議使用3-5代狀態較好且融合度70%-80%的HUVEC細胞

細胞數量過少會使細胞無法形成連續的網絡

4 - 18 h可見血管生成。建議每4個小時觀察一次。

侵襲實驗

細胞不轉移

細胞侵襲轉移能力比較弱

細胞的活性太差,活性不好的細胞做侵襲實驗難度較大

用胰酶消化后,必須將含血清的培養基洗去

類器官實驗

類器官傳代的標準

不同類器官時間不同,通常7-14日、直徑100-200um左右可以傳代,有些發育慢的可能要數周才能發育到適合傳代狀態。

鑒定類器官的方法

最基礎的通過顯微鏡和H&E染色觀察類器官形態;進一步可以用免疫熒光檢測該類器官是否表達相應的biomarker;

為什么觀察到的形態卻和文獻不一致?

決定類器官形態的因素有很多,樣本來源是否相同、選用的細胞因子品質是否有差異都有可能改變最終的類器官形態。

05

產品詳情

產品名稱

貨號

規格

Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質膠

40183ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠

40184ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基質膠

40185ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix GFR,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠

40186ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基質膠

40187ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠

40188ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基質膠

40189ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基質膠

40190ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠

40191ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free Plus基質膠

40192ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

 

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