01
前 言
基質膠是3D細胞培養、類器官、成瘤、侵襲、血管生成等實驗的“萬能支架”。然而,從解凍到鋪板,從濃度選擇到結果判讀,稍不留神就可能“翻車”。翌圣生物結合上萬次實驗反饋,整理出這份“避坑指南”,助你一次上手,穩拿高分數據。
02
到貨 & 儲存
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問題 |
翌圣建議 |
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收到貨后如何保存? |
將本產品置于-20℃環境存放;若短暫放置,4 ℃不超過7天。 |
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能否反復凍融? |
不建議反復凍融;首次融化后立即分裝(200 µL/管),-20 ℃保存。 |
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如何進行融化? |
冷凍狀態的基質膠可以在操作前一天埋藏于碎冰中,再轉移入4 ℃冰箱,次日即可使用。適當延長4℃融化時間可以有效減少基質膠中的氣泡。 |
03
顏色/濃度怎么選?
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類型 |
特點 |
適用場景 |
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含酚紅 |
pH指示 |
常規實驗都可以使用含酚紅產品,由于酚紅存在時,在溫度、pH不同的情況下液體會出現顏色的差異,顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化。 |
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無酚紅 |
無顏色干擾 |
涉及顏色檢測的實驗,推薦使用不含酚紅的基質膠,如對子宮內膜細胞培養必須使用不含酚紅的基質膠。此外,酚紅是一種潛在的內分泌干擾物,有可能會干擾實驗動物體內激素的自然產生和代謝能力。 |
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標準濃度 |
蛋白濃度:8 - 12 mg/mL |
Transwell實驗、皮下成瘤實驗 |
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高濃度 |
蛋白濃度:18 - 22 mg/mL,凝膠3-5 min |
皮下成瘤中較難成瘤的細胞系 |
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低生長因子 |
標準濃度基質膠的基礎上做了減生長因子處理 |
類器官培養、血管生成 |
04
實驗細節
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場景 |
高頻問題 |
解決錦囊 |
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皮下成瘤 |
荷瘤不成功可能的原因 |
取處于對數生長期的細胞,細胞達 80 - 90% 左右密度為宜 |
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選擇 4 - 6 周齡裸鼠,小于 4 周可能不耐受過早死亡,大于 6 周免疫力會增強,不易成瘤。 |
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可能是小鼠免疫排斥,建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠 |
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可以在接種后一周補種1次,可以很好的提高成功率 |
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腫瘤長起來后又消失的原因 |
很可能是由于炎癥反應,腫瘤細胞被小鼠自身吸收造成的。若后續腫瘤依舊未長出來,可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠。 |
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血管生成 |
成管實驗中細胞 不能形成連續的網格 |
建議使用3-5代狀態較好且融合度70%-80%的HUVEC細胞 |
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細胞數量過少會使細胞無法形成連續的網絡 |
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4 - 18 h可見血管生成。建議每4個小時觀察一次。 |
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侵襲實驗 |
細胞不轉移 |
細胞侵襲轉移能力比較弱 |
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細胞的活性太差,活性不好的細胞做侵襲實驗難度較大 |
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用胰酶消化后,必須將含血清的培養基洗去 |
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類器官實驗 |
類器官傳代的標準 |
不同類器官時間不同,通常7-14日、直徑100-200um左右可以傳代,有些發育慢的可能要數周才能發育到適合傳代狀態。 |
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鑒定類器官的方法 |
最基礎的通過顯微鏡和H&E染色觀察類器官形態;進一步可以用免疫熒光檢測該類器官是否表達相應的biomarker; |
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為什么觀察到的形態卻和文獻不一致? |
決定類器官形態的因素有很多,樣本來源是否相同、選用的細胞因子品質是否有差異都有可能改變最終的類器官形態。 |
05
產品詳情
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產品名稱 |
貨號 |
規格 |
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Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質膠 |
40183ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠 |
40184ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基質膠 |
40185ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix GFR,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠 |
40186ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基質膠 |
40187ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠 |
40188ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基質膠 |
40189ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基質膠 |
40190ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠 |
40191ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free Plus基質膠 |
40192ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
