?EdU系列熒光檢測產品

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>>>背景導讀

測定DNA合成情況是細胞增殖、細胞周期、細胞毒性、DNA復制及修復、信號通路等研究方向常用方法之一，用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物（BrdU、EdU），兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。BrdU免疫檢測需要變性DNA后才能與抗體結合，而EdU因為其特有的炔羥基團可以與一些熒光染料發生“Click”化學反應，無需變形，從而將細胞標記上熒光，因此應用更廣泛。

>>>EdU和Brdu檢測區別

BrdU?檢測增殖細胞的特點及原理

BrdU（5-Bromo-2-deoxyUridine，5-溴脫氧尿嘧啶核苷）是一種嘧啶類似物，其化學結構特點是溴替代了胸腺嘧啶環與５位C原子連接的甲基可競爭性摻入到S期新合成的DNA中。BrdU在細胞周期的S期和細胞一起孵育的BrdU能滲入DNA分子中，再結合BrdU抗體與滲入DNA的BrdU特異性結合就能夠檢測到DNA復制活躍的細胞。但BrdU免疫檢測有其缺點就是需要變性DNA（必須用高濃度的鹽酸，乙酸或酶解處理）后才能與抗體結合，但這就破壞了DNA雙鏈結構，影響了其他染料的結合染色，導致染色彌散，準確性降低等問題。

圖1：BrdU滲入DNA分子過程

EdU?檢測增殖細胞的特點及原理

EdU（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，５‐乙炔基‐２′脫氧尿嘧啶核苷）也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物，其化學結構特點是脫氧胸腺嘧啶環上與５位C原子相連的甲基被乙炔基取代，在S期細胞增殖時可作為底物摻入到正在復制的DNA鏈中，

EdU在細胞增殖時能夠插入正在復制的DNA分子中，基于EdU與染料的共軛反應可以有效地檢測處于S期的細胞百分數。熒光染料可以同EdU發生“Click”化學反應（點擊法），從而將增殖的細胞標記上熒光?？捎糜诩毎上瘛⒘魇?、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等，EdU亦適用于活體注射，穩定，對活體無副作用。

與傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU檢測法更簡單、更快速、更準確，不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。

圖2：EdU滲入DNA分子過程

表1：EDU和Brdu標記方法對比區別

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>>>什么是“點擊法”

基于EdU的點擊法標記技術是由銅催化的疊氮化物-炔烴環加成反應（圖3），將其應用于細胞的原位標記需兩步過程。首先，其中一個生物反應配體是由疊氮化物或炔烴與“構件”（如核苷酸，核苷，氨基酸，單糖或脂肪酸）連接構成；隨后將另一是由熒光染料、生物素或其他檢測試劑連接的互補炔烴或疊氮化物構成的反應配體在催化劑銅的存在條件下“點擊”到位，完成反應

點擊化學與使用溴脫氧尿苷(BrdU)檢測法不同，EdU點擊檢測法不是基于抗體，無需DNA變性即可檢測摻入的核苷。EdU點擊檢測法可以與R-PE、GFP等熒光蛋白復用提高效力，該技術的優勢在于化學方面獨特的小分子和低背景的標記物以及檢測基團之間特異性共價反應。小分子的疊氮化物試劑可以有效地接觸DNA而無需對細胞進行破壞處理。進而簡化了測定流程并且獲得的結果與使用傳統的BrdU相似或更好

圖3：Click-iT EdU點擊法檢測核酸過程

>>>EdU系列產品特點

熒光染料可以在銅離子催化下同EdU發生“Click”化學反應，將增細胞標記上相關的熒光?？捎糜诩毎上?、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測以及病毒增殖活性檢測等，EdU亦適用于活體注射，穩定，對活體無副作用。

EdU檢測的優點：

?操作簡單—?僅需EdU孵育；細胞固定化；熒光檢測三步；

?檢測快速—?只需2.5 h；

?結果準確—?標記率高且無需變性，更好地保護細胞形態；

?兼容性高—?允許與多種抗體、熒光染料同時標記；

?應用性廣—?細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測、病毒增殖活性檢測等。

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1、Click-iT EdU熒光成像觀察（綠色、紅色、遠紅色）

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Yefluor 488Click-iT EdU點擊法檢測Hela細胞，?Yefluor 488Click-iT EdU點擊法檢測Hela細胞，

不加羥基脲（DNA合成抑制劑）?加羥基脲（DNA合成抑制劑）??

Yefluor 594 Click-iT EdU點擊法檢測Hela細胞，?Yefluor 594 Click-iT EdU點擊法檢測Hela細胞，

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Yefluor 647 Click-iT EdU點擊法檢測Hela細胞，?Yefluor 647 Click-iT EdU點擊法檢測Hela細胞，

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2、Click-iT EdU流式細胞儀觀察（綠色、紅色、遠紅色）

A1?:?Yefluor 488Click-iT EdU點擊法檢測Hela細胞，?A2:?Yefluor 488Click-iT EdU點擊法檢測Hela細胞，

加羥基脲（DNA合成抑制劑）?不加羥基脲（DNA合成抑制劑）

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加羥基脲（DNA合成抑制劑）?不加羥基脲（DNA合成抑制劑）

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