MDCK細胞介紹與殘留DNA質控

?MDCK細胞是1958年從Cocker Spaniel腎臟組織分離培育建立的細胞株。許多研究表明MDCK細胞系可廣泛用于多種病毒的擴增和純化，尤其是對流感病毒的感染效率高、增殖快，且流感病毒不易變異的優點，被公認為目前最適合流感疫苗生產的細胞系之一。?MDCK細胞作為宿主工程細胞，其宿主DNA殘留將對機體產生安全性風險。盡管在MDCK細胞基質流感疫苗生產過程中已有殘留DNA的去除工藝，包括采用超濾、核酸酶處理、層析、β-丙內酯滅活等方法，但疫苗產品中仍有可能殘留宿主DNA及其片段。因此，為控制疫苗質量，需要對疫苗中MDCK宿主細胞殘留DNA及其片段進行監測。

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相關法規監管要求

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WHO和美國FDA現行指導方針推薦成品中殘留DNA不高于10 ng/劑，長度不大于200 bp；

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美國FDA發布的指導原則中指出生物制品宿主細胞DNA殘余限度為100 pg/劑，對于大劑量生物制品如單克隆抗體，根據其殘留DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10 ng/劑；

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歐洲藥典通則規定的生物制品殘留DNA限度大多為不超過10 ng/劑，但對個別疫苗的殘留DNA限定標準更嚴格，如甲型肝炎滅活疫苗中的DNA殘留量不得超過100 pg/劑，乙型肝炎疫苗中的DNA殘留量不得超過10 pg/劑。

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殘留DNA檢測

《中華人民共和國藥典》2020年版第三部規定，外源性DNA殘留檢測采用DNA探針雜交法、熒光染料色法和定量PCR法。目前市場上對宿主細胞殘留DNA檢測，主要采用熒光探針qPCR方法，qPCR法具有極高的靈敏度、序列特異性和準確性，可為生物制藥工業在工藝研究和成品質量控制方面提供可靠的檢測手段，現也已成為各生物制品廠家首選檢測方法。?為控制疫苗生產質量，需要對疫苗生產全過程進行安全性質量控制。翌圣生物從市場需求出發，自主研發了MDCK宿主細胞DNA殘留（qPCR）檢測試劑盒，以監測生物制品中MDCK宿主細胞殘留DNA濃度。其能專一快速的檢測抗體藥、重組蛋白疫苗等生物制品研發和生產過程的中間品、半成品和成品中 DNA 殘留量。還研發了與MDCK殘留DNA檢測試劑盒配套使用的宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒，以及配套的自動化核酸提取儀器。

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產品特點

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靈敏度高：檢測下限可低至0.5fg/μL；

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準確性高：DNA參考品與國家標準物質標曲基本無偏差，檢測值CV＜5%；

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精密度高：重復性CV值＜10%，好于行業標準（15%），中間精密度＜15%；

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專屬性強：不同細胞系間無交叉反應；

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定量準確：配套專屬磁珠法樣本前處理試劑盒；

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操作時間短：3小時內完成全部檢測流程；

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穩定性好：多次反復凍融擴增效率仍較高，-20℃可儲存2年；

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耐用性強：DNA碎片化程度不影響檢測結果，碎片化DNA回收率高，適配多款qPCR儀器。

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產品流程

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磁珠法樣品前處理試劑盒

??可以手動提取，也可以與全自動核酸提取儀搭配使用。

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??搭配翌圣磁珠法樣本前處理試劑盒解放雙手，自動化提取樣本中的宿主細胞殘留DNA。

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MDCK宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒

??對使用樣本前處理試劑盒提取的樣本中的殘留DNA進行熒光探針q-PCR定量。試劑盒線性范圍為：3fg/μL~300pg/μL，R2=1，擴增效率為99.29%，各濃度檢測值CV<15%。

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產品信息

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