HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）是研究血管生成的核心模型細(xì)胞，其高增殖能力和成管特性可模擬腫瘤血管新生過程。通過將HUVEC接種于基質(zhì)膠（模擬基底膜微環(huán)境），細(xì)胞可在體外形成復(fù)雜的三維管狀網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，廣泛用于：
? 抗血管生成藥物篩選
? 腫瘤微環(huán)境機(jī)制研究
? 血管生成相關(guān)基因/信號(hào)通路驗(yàn)證
PART.02
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)前一天將Ceturegel®基質(zhì)膠置于冰盒中，放入 4℃冰箱，使膠能過夜緩慢融化。
開始實(shí)驗(yàn)前，將Ceturegel®基質(zhì)膠始終保持放在冰盒中。
準(zhǔn)備24孔板，于每孔中加入100µL - 150µL Ceturegel®基質(zhì)膠，避免產(chǎn)生氣泡。在37℃培養(yǎng)箱中放置30 min - 1 h。（注意槍頭要垂直于內(nèi)孔的正上方加入 Ceturegel®基質(zhì)膠，防止有孔壁殘留基質(zhì)膠。若是孔的底部沒有鋪滿膠，可以晃動(dòng)一下孔板，使底部鋪膠均勻）。
當(dāng)HUVEC細(xì)胞長滿70 ~ 80%時(shí)，消化下來，并用含10%FBS的DMEM重懸，計(jì)數(shù)，使每孔加入1.2×105細(xì)胞/孔，重復(fù)三孔。
37℃培養(yǎng)箱孵育，每4 h觀察1次，4 - 18 h可見血管生成。
小心的移除上孔內(nèi)培養(yǎng)基，注意不要碰到膠或者細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。加入Calcein染料進(jìn)行染色。
結(jié)果觀察。
PART.03
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖.血管生成結(jié)果及染色圖
PART.04
常見問題及解答
為什么我的成管實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞 不能形成連續(xù)的網(wǎng)格？
QA
①建議使用3-5代狀態(tài)較好且融合度70%-80%的HUVEC細(xì)胞進(jìn)行成管試驗(yàn)，此時(shí)細(xì)胞成管能力比較強(qiáng)。
②超過15代HUVEC細(xì)胞成管能力明顯降低。
③細(xì)胞數(shù)量過少會(huì)使細(xì)胞無法形成連續(xù)的網(wǎng)絡(luò)。
成管實(shí)驗(yàn)到底需要幾個(gè)小時(shí)？
QA
成管時(shí)間與細(xì)胞狀態(tài)密切相關(guān)。細(xì)胞狀態(tài)好時(shí)成管時(shí)間短。建議第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)，每4個(gè)小時(shí)觀察一次。
PART.05
產(chǎn)品推薦
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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40186ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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40130ES |
50 mL/500 mL |
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40719ES |
1×50μg/2×50μg |
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41406ES |
500 mL |