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AT7867

MCE 國際站：AT7867

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-12059

CAS：857531-00-1

純度：99.88%

存儲條件：Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 2 years -20°C 1 year

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產品活性：AT7867 是一種 ATP 競爭性的 Akt1/Akt2/Akt3 和 p70S6K/PKA 抑制劑，IC50 分別為 32 nM/17 nM/47 nM 和 85 nM/20 nM。

體外：AT7867 對 AKT2 的抑制作用顯示為 ATP 競爭性，Ki 為 18nM。AT7867 還顯示出對結構相關的 AGC 激酶 p70S6K 和 PKA 的強效活性，但對來自其他激酶亞家族的激酶顯示出明顯的選擇性窗口。體外生長抑制研究表明，AT7867 可抑制多種人類癌細胞系的增殖。AT7867 似乎在抑制 MES-SA 子宮、MDA-MB-468 和 MCF-7 乳腺癌以及 HCT116 和 HT29 結腸細胞系中的增殖方面最有效（IC50 值范圍為 0.9-3 μM），而在測試的兩種前列腺細胞系中效果最差（IC50 值范圍為 10-12 μM）[1]。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

體內：體內：口服 20 mg/kg 后，AT7867 從血漿中消除的情況似乎與靜脈注射后相似?？诜?20 mg/kg 后，AT7867 的血漿水平至少在 6 小時內保持在 0.5 μM 以上。假設靜脈注射后的藥代動力學為線性，則口服途徑的生物利用度計算為 44%。因此，使用此模型進行體內藥效學 (PD) 生物標志物研究。在藥代動力學和耐受性研究之后，將 AT7867 劑量（90 mg/kg 口服或 20 mg/kg 腹腔注射）施用于患有 MES-SA 腫瘤的無胸腺小鼠，并隨時間監測腫瘤中 GSK3β 和 S6RP 的磷酸化狀態。在用 AT7867 治療后 2 小時和 6 小時，可以明顯抑制兩種通路活性標志物的磷酸化。到 24 小時后，GSK3β 和 S6RP 的總水平均大幅降低[1]。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

動物實驗：使用雄性無胸腺 BALB/c 小鼠 (nu/nu)。將單劑量 AT7867 以 5 mg/kg 靜脈注射 (iv) 和 20 mg/kg 口服 (po) 的劑量施用于 BALB/c 小鼠。在以下每個時間點從重復動物中采集血漿樣本：靜脈注射后 0.083、0.167、0.33、0.67、1、2、4、6、16 和 24 小時，以及口服給藥后 0.25、0.5、1、2、4、6 和 24 小時。通過心臟穿刺對小鼠進行放血，并將所有血液樣本離心以獲得血漿，然后在 -20°C 下冷凍直至分析。對于生物分析，所有血漿樣本均通過用含有內標的乙腈進行蛋白質沉淀來制備。樣品提取物的定量是通過與使用 AT7867 構建的標準校準線進行比較并使用抑制劑特異性液相色譜串聯質譜 (LC-MS/MS) 方法進行的。確定藥代動力學參數。MCE 尚未獨立確認這些方法的準確性。它們僅供參考。

細胞實驗：將細胞以每孔 16,000 個細胞的密度接種于 96 孔微孔板中，培養基中添加 10% FBS，培養 24 小時后用 AT7867 處理。將 AT7867 或載體對照加入細胞中 1 小時。隨后，用 3% 多聚甲醛、0.25% 戊二醛、0.25% Triton-X100 固定細胞，用含 0.1% Tween-20 (TBST) 的 Tris 緩沖鹽水中的 5% 牛奶清洗和封閉，然后用磷酸化 GSK3β（絲氨酸 9）抗體孵育過夜。然后清洗微孔板，添加二抗，并使用 DELFIA 試劑增強信號。將銪計數標準化為蛋白質濃度，并使用非線性回歸分析和 S 形劑量反應（可變斜率）方程 [1] 在 GraphPad Prism 中計算每種抑制劑的 IC50 值。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

激酶實驗：AKT2、PKA、p70S6K 和 CDK2/cyclinA 的激酶測定均采用放射性濾光片結合形式進行。測定反應在化合物存在下進行。對于 AKT2，將 AKT2 酶和 25 μM AKTide-2T 肽 (HARKRERTYSFGHHA) 在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原釩酸鈉、1 mM DTT、10 μg/mL BSA 和 30 μM ATP (1.16 Ci/mmol) 中孵育 4 小時。對于 PKA，將 PKA 酶和 50 μM 肽 (GRTGRRNSI) 在 2 mM MOPS (pH 7.2)、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 正釩酸鹽、1 mM DTT 和 40 μM ATP (0.88 Ci/mmol) 中孵育 20 分鐘。對于 p70S6K，將 p70S6K 酶和 25 μM 肽底物 (AKRRRLSSLRA) 在 10 mM MOPS (pH 7)、0.2 mM EDTA、1 mM MgCl2、0.01% β-巰基乙醇、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij-35、0.5% 甘油和 15μM ATP (2.3 Ci/mmol) 中孵育 60 分鐘。對于 CDK2，將 CDK2/cyclinA 酶和 0.12 μg/ml 組蛋白 H1 在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 正釩酸鈉、1 mM DTT、0.1 mg/ml BSA 和 45 μM ATP (0.78 Ci/mmol) 中孵育 4 小時。通過添加過量的正磷酸來停止檢測反應，然后將停止的反應混合物轉移到 Millipore MAPH 濾板中并過濾。然后清洗濾板，添加閃爍劑并通過 Packard TopCount 上的閃爍計數測量放射性。使用 GraphPad Prism 軟件從重復曲線計算 IC50 值。進行 AKT1 和 3 酶測定，同時進行所有其他酶測定[1]。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

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參考文獻：

[1]. Grimshaw KM, et al. AT7867 is a potent and oral inhibitor of AKT and p70 S6 kinase that induces pharmacodynamic changes and inhibits human tumor xenograft growth. Mol Cancer Ther, 2010, 9(5), 1100-1110.