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AT7867

MCE 國(guó)際站：AT7867

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-12059

CAS：857531-00-1

純度：99.88%

存儲(chǔ)條件：Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 2 years -20°C 1 year

運(yùn)輸條件：美國(guó)大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產(chǎn)品活性：AT7867 是一種 ATP 競(jìng)爭(zhēng)性的 Akt1/Akt2/Akt3 和 p70S6K/PKA 抑制劑，IC50 分別為 32 nM/17 nM/47 nM 和 85 nM/20 nM。

體外：AT7867 對(duì) AKT2 的抑制作用顯示為 ATP 競(jìng)爭(zhēng)性，Ki 為 18nM。AT7867 還顯示出對(duì)結(jié)構(gòu)相關(guān)的 AGC 激酶 p70S6K 和 PKA 的強(qiáng)效活性，但對(duì)來(lái)自其他激酶亞家族的激酶顯示出明顯的選擇性窗口。體外生長(zhǎng)抑制研究表明，AT7867 可抑制多種人類癌細(xì)胞系的增殖。AT7867 似乎在抑制 MES-SA 子宮、MDA-MB-468 和 MCF-7 乳腺癌以及 HCT116 和 HT29 結(jié)腸細(xì)胞系中的增殖方面最有效（IC50 值范圍為 0.9-3 μM），而在測(cè)試的兩種前列腺細(xì)胞系中效果最差（IC50 值范圍為 10-12 μM）[1]。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

體內(nèi)：體內(nèi)：口服 20 mg/kg 后，AT7867 從血漿中消除的情況似乎與靜脈注射后相似。口服 20 mg/kg 后，AT7867 的血漿水平至少在 6 小時(shí)內(nèi)保持在 0.5 μM 以上。假設(shè)靜脈注射后的藥代動(dòng)力學(xué)為線性，則口服途徑的生物利用度計(jì)算為 44%。因此，使用此模型進(jìn)行體內(nèi)藥效學(xué) (PD) 生物標(biāo)志物研究。在藥代動(dòng)力學(xué)和耐受性研究之后，將 AT7867 劑量（90 mg/kg 口服或 20 mg/kg 腹腔注射）施用于患有 MES-SA 腫瘤的無(wú)胸腺小鼠，并隨時(shí)間監(jiān)測(cè)腫瘤中 GSK3β 和 S6RP 的磷酸化狀態(tài)。在用 AT7867 治療后 2 小時(shí)和 6 小時(shí)，可以明顯抑制兩種通路活性標(biāo)志物的磷酸化。到 24 小時(shí)后，GSK3β 和 S6RP 的總水平均大幅降低[1]。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：使用雄性無(wú)胸腺 BALB/c 小鼠 (nu/nu)。將單劑量 AT7867 以 5 mg/kg 靜脈注射 (iv) 和 20 mg/kg 口服 (po) 的劑量施用于 BALB/c 小鼠。在以下每個(gè)時(shí)間點(diǎn)從重復(fù)動(dòng)物中采集血漿樣本：靜脈注射后 0.083、0.167、0.33、0.67、1、2、4、6、16 和 24 小時(shí)，以及口服給藥后 0.25、0.5、1、2、4、6 和 24 小時(shí)。通過(guò)心臟穿刺對(duì)小鼠進(jìn)行放血，并將所有血液樣本離心以獲得血漿，然后在 -20°C 下冷凍直至分析。對(duì)于生物分析，所有血漿樣本均通過(guò)用含有內(nèi)標(biāo)的乙腈進(jìn)行蛋白質(zhì)沉淀來(lái)制備。樣品提取物的定量是通過(guò)與使用 AT7867 構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)線進(jìn)行比較并使用抑制劑特異性液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-MS/MS) 方法進(jìn)行的。確定藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。MCE 尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將細(xì)胞以每孔 16,000 個(gè)細(xì)胞的密度接種于 96 孔微孔板中，培養(yǎng)基中添加 10% FBS，培養(yǎng) 24 小時(shí)后用 AT7867 處理。將 AT7867 或載體對(duì)照加入細(xì)胞中 1 小時(shí)。隨后，用 3% 多聚甲醛、0.25% 戊二醛、0.25% Triton-X100 固定細(xì)胞，用含 0.1% Tween-20 (TBST) 的 Tris 緩沖鹽水中的 5% 牛奶清洗和封閉，然后用磷酸化 GSK3β（絲氨酸 9）抗體孵育過(guò)夜。然后清洗微孔板，添加二抗，并使用 DELFIA 試劑增強(qiáng)信號(hào)。將銪計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化為蛋白質(zhì)濃度，并使用非線性回歸分析和 S 形劑量反應(yīng)（可變斜率）方程 [1] 在 GraphPad Prism 中計(jì)算每種抑制劑的 IC50 值。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

激酶實(shí)驗(yàn)：AKT2、PKA、p70S6K 和 CDK2/cyclinA 的激酶測(cè)定均采用放射性濾光片結(jié)合形式進(jìn)行。測(cè)定反應(yīng)在化合物存在下進(jìn)行。對(duì)于 AKT2，將 AKT2 酶和 25 μM AKTide-2T 肽 (HARKRERTYSFGHHA) 在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原釩酸鈉、1 mM DTT、10 μg/mL BSA 和 30 μM ATP (1.16 Ci/mmol) 中孵育 4 小時(shí)。對(duì)于 PKA，將 PKA 酶和 50 μM 肽 (GRTGRRNSI) 在 2 mM MOPS (pH 7.2)、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 正釩酸鹽、1 mM DTT 和 40 μM ATP (0.88 Ci/mmol) 中孵育 20 分鐘。對(duì)于 p70S6K，將 p70S6K 酶和 25 μM 肽底物 (AKRRRLSSLRA) 在 10 mM MOPS (pH 7)、0.2 mM EDTA、1 mM MgCl2、0.01% β-巰基乙醇、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij-35、0.5% 甘油和 15μM ATP (2.3 Ci/mmol) 中孵育 60 分鐘。對(duì)于 CDK2，將 CDK2/cyclinA 酶和 0.12 μg/ml 組蛋白 H1 在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 正釩酸鈉、1 mM DTT、0.1 mg/ml BSA 和 45 μM ATP (0.78 Ci/mmol) 中孵育 4 小時(shí)。通過(guò)添加過(guò)量的正磷酸來(lái)停止檢測(cè)反應(yīng)，然后將停止的反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到 Millipore MAPH 濾板中并過(guò)濾。然后清洗濾板，添加閃爍劑并通過(guò) Packard TopCount 上的閃爍計(jì)數(shù)測(cè)量放射性。使用 GraphPad Prism 軟件從重復(fù)曲線計(jì)算 IC50 值。進(jìn)行 AKT1 和 3 酶測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行所有其他酶測(cè)定[1]。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

熱銷產(chǎn)品：Gemcitabine  | 4-Hydroxytamoxifen  | Metformin  | Obeticholic acid  | MS67  | Sorafenib  | Mitoquinone (mesylate)  | Niraparib  | Everolimus  | Capsaicin

Trending products：Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds  |  Oligonucleotides

參考文獻(xiàn)：

[1]. Grimshaw KM, et al. AT7867 is a potent and oral inhibitor of AKT and p70 S6 kinase that induces pharmacodynamic changes and inhibits human tumor xenograft growth. Mol Cancer Ther, 2010, 9(5), 1100-1110.