EdU系列熒光檢測(cè)產(chǎn)品
------照亮你的視野
>>>背景導(dǎo)讀
測(cè)定DNA合成情況是細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞毒性、DNA復(fù)制及修復(fù)、信號(hào)通路等研究方向常用方法之一，用到的檢測(cè)試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物（BrdU、EdU），兩種試劑在檢測(cè)方面有一些不同之處。BrdU免疫檢測(cè)需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，而EdU因?yàn)槠涮赜械娜擦u基團(tuán)可以與一些熒光染料發(fā)生“Click”化學(xué)反應(yīng)，無(wú)需變形，從而將細(xì)胞標(biāo)記上熒光，因此應(yīng)用更廣泛。
>>>EdU和Brdu檢測(cè)區(qū)別
BrdU?檢測(cè)增殖細(xì)胞的特點(diǎn)及原理
BrdU（5-Bromo-2-deoxyUridine，5-溴脫氧尿嘧啶核苷）是一種嘧啶類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是溴替代了胸腺嘧啶環(huán)與５位C原子連接的甲基可競(jìng)爭(zhēng)性摻入到S期新合成的DNA中。BrdU在細(xì)胞周期的S期和細(xì)胞一起孵育的BrdU能滲入DNA分子中，再結(jié)合BrdU抗體與滲入DNA的BrdU特異性結(jié)合就能夠檢測(cè)到DNA復(fù)制活躍的細(xì)胞。但BrdU免疫檢測(cè)有其缺點(diǎn)就是需要變性DNA（必須用高濃度的鹽酸，乙酸或酶解處理）后才能與抗體結(jié)合，但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，影響了其他染料的結(jié)合染色，導(dǎo)致染色彌散，準(zhǔn)確性降低等問(wèn)題。
圖1：BrdU滲入DNA分子過(guò)程
EdU?檢測(cè)增殖細(xì)胞的特點(diǎn)及原理
EdU（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，５‐乙炔基‐２′脫氧尿嘧啶核苷）也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與５位C原子相連的甲基被乙炔基取代，在S期細(xì)胞增殖時(shí)可作為底物摻入到正在復(fù)制的DNA鏈中，
EdU在細(xì)胞增殖時(shí)能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中，基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以有效地檢測(cè)處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。熒光染料可以同EdU發(fā)生“Click”化學(xué)反應(yīng)（點(diǎn)擊法），從而將增殖的細(xì)胞標(biāo)記上熒光。可用于細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測(cè)、線粒體活性檢測(cè)以及病毒增殖活性檢測(cè)等，EdU亦適用于活體注射，穩(wěn)定，對(duì)活體無(wú)副作用。
與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法相比，EdU檢測(cè)法更簡(jiǎn)單、更快速、更準(zhǔn)確，不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測(cè)細(xì)胞增殖的真實(shí)情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測(cè)速度。
圖2：EdU滲入DNA分子過(guò)程
表1：EDU和Brdu標(biāo)記方法對(duì)比區(qū)別
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產(chǎn)品 對(duì)比項(xiàng)目 |
EdU |
BrdU |
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分子量大小 |
252.22 g·mol?1 |
307.098 g·mol?1 |
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標(biāo)記檢測(cè)方式 |
化學(xué)反應(yīng)（點(diǎn)擊法） |
免疫反應(yīng) |
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是否影響其他標(biāo)記 |
不影響 |
影響 |
|
DNA是否變性 |
否 |
是 |
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標(biāo)記檢測(cè)時(shí)長(zhǎng) |
≤2.5 h |
過(guò)夜 |
|
檢測(cè)靈敏度 |
高 |
一般 |
?
>>>什么是“點(diǎn)擊法”
基于EdU的點(diǎn)擊法標(biāo)記技術(shù)是由銅催化的疊氮化物-炔烴環(huán)加成反應(yīng)（圖3），將其應(yīng)用于細(xì)胞的原位標(biāo)記需兩步過(guò)程。首先，其中一個(gè)生物反應(yīng)配體是由疊氮化物或炔烴與“構(gòu)件”（如核苷酸，核苷，氨基酸，單糖或脂肪酸）連接構(gòu)成；隨后將另一是由熒光染料、生物素或其他檢測(cè)試劑連接的互補(bǔ)炔烴或疊氮化物構(gòu)成的反應(yīng)配體在催化劑銅的存在條件下“點(diǎn)擊”到位，完成反應(yīng)
點(diǎn)擊化學(xué)與使用溴脫氧尿苷(BrdU)檢測(cè)法不同，EdU點(diǎn)擊檢測(cè)法不是基于抗體，無(wú)需DNA變性即可檢測(cè)摻入的核苷。EdU點(diǎn)擊檢測(cè)法可以與R-PE、GFP等熒光蛋白復(fù)用提高效力，該技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于化學(xué)方面獨(dú)特的小分子和低背景的標(biāo)記物以及檢測(cè)基團(tuán)之間特異性共價(jià)反應(yīng)。小分子的疊氮化物試劑可以有效地接觸DNA而無(wú)需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破壞處理。進(jìn)而簡(jiǎn)化了測(cè)定流程并且獲得的結(jié)果與使用傳統(tǒng)的BrdU相似或更好
圖3：Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)核酸過(guò)程
>>>EdU系列產(chǎn)品特點(diǎn)
熒光染料可以在銅離子催化下同EdU發(fā)生“Click”化學(xué)反應(yīng)，將增細(xì)胞標(biāo)記上相關(guān)的熒光。可用于細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測(cè)以及病毒增殖活性檢測(cè)等，EdU亦適用于活體注射，穩(wěn)定，對(duì)活體無(wú)副作用。
EdU檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)：
?操作簡(jiǎn)單—?僅需EdU孵育；細(xì)胞固定化；熒光檢測(cè)三步；
?檢測(cè)快速—?只需2.5 h；
?結(jié)果準(zhǔn)確—?標(biāo)記率高且無(wú)需變性，更好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)；
?兼容性高—?允許與多種抗體、熒光染料同時(shí)標(biāo)記；
?應(yīng)用性廣—?細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測(cè)、病毒增殖活性檢測(cè)等。
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1、Click-iT EdU熒光成像觀察（綠色、紅色、遠(yuǎn)紅色）
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Yefluor 488Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，?Yefluor 488Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，
不加羥基脲（DNA合成抑制劑）?加羥基脲（DNA合成抑制劑）
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Yefluor 594 Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，?Yefluor 594 Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，
不加羥基脲（DNA合成抑制劑）?加羥基脲（DNA合成抑制劑）
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Yefluor 647 Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，?Yefluor 647 Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，
不加羥基脲（DNA合成抑制劑）?加羥基脲（DNA合成抑制劑）
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2、Click-iT EdU流式細(xì)胞儀觀察（綠色、紅色、遠(yuǎn)紅色）
A1?:?Yefluor 488Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，?A2:?Yefluor 488Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，
加羥基脲（DNA合成抑制劑）?不加羥基脲（DNA合成抑制劑）
B1 :?Yefluor 594Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，?B2:?Yefluor 594Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，
加羥基脲（DNA合成抑制劑）?不加羥基脲（DNA合成抑制劑）
C1 :?Yefluor 647Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，?C2:?Yefluor 647Click-iT EdU點(diǎn)擊法檢測(cè)Hela細(xì)胞，
加羥基脲（DNA合成抑制劑）?不加羥基脲（DNA合成抑制劑）
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>>>相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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