每年的5月8號是“世界卵巢癌日”，根據世界衛生組織國際癌癥研究機構（IARC）發布的2020年全球癌癥發病數據報告顯示：2020年中國新發癌癥病例457萬例，其中男性248萬例，女性209萬例，2020年中國癌癥死亡病例為300萬例，其中男性182萬例，女性118萬例，在婦科三大腫瘤中卵巢癌的死亡率排名第一。

卵巢癌類器官（organoids）是指利用卵巢瘤細胞等在體外培養出的3D細胞培養物并具有一定的空間結構組織類似物。卵巢癌類器官可以作為疾病模型，相較于傳統2D疾病模型，其在闡明疾病的發展、穩態性和發病機理等與體內環境更加接近，能作為卵巢癌治療、診斷和發病機制研究的理想試驗模型。

卵巢癌類器官構建

1、取材：標本離體后，盡快取材。采用無菌器械，保證無菌環境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中，4℃轉運。

2、清洗：在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復清洗后，去除 PBS。

3、重復清洗：重復第 2 步驟 3 次。

4、組織處理：去除 PBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代 組織保存液的無菌培養皿中，用無菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）。

5、重復清洗：使用常溫PBS，重復第2步驟3次。

6、收集組織碎片，加入組織消化液消化20~30 min，過70 μm篩網，收集卵巢癌細胞。

7、紅細胞裂解：加入10 mL紅細胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min。

8、重復清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12，重復第 2步驟3次。

9、類器官種板：調整細胞密度為2~3×106，與基質膠1:1均勻混合，將細胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入預熱的類器官培養液，每個孔 750 uL。

10、類器官培養：將培養板放在 37℃  CO2培養箱培養,每2天更換培養液。加入培養液時，吸頭朝向側壁，緩慢加入。

11、類器官觀察：每天觀察類器官并拍照，了解初始類器官數量、增殖速 度、形態、微生物污染情況等。

實驗結果

FAQ

問 

基質膠的操作要注意哪些事項？

答 

所有操作需在無菌環境下進行，應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀。

問 

獲取臨床樣本，如何避免污染？

答 

①取材時盡量保證無菌取材；

②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見與外界環境有接觸可能的胃、腸、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min，其他常見腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右；

③提取細胞過程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素。

問 

腫瘤組織采集、保存、運輸注意事項

答 

盡可能多采集腫瘤細胞含量高的腫瘤組織，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時間，以減少污染概率；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專用樣本保存液的無菌管中，低溫（4 ℃左右）下快速運轉至檢測單位（盡量保證采樣后2~4 h內送到）。

問 

病灶和癌旁培養出的類器官有區別嗎？腫瘤組織的取材部位有什么要求？

答 

有差別，腫瘤本身具有異質性，不同來源的類器官之間存在差異是很常見的現象，從形態上看，原發病灶來源的類器官比癌旁來源的類器官更具有侵襲性的結構，一般病灶形態上更加不規則一些。如果希望在建?；蛩幬锖Y選方面盡量減小誤差，可以在活性好的地方多位置取樣。

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