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什么是LAMP？

LAMP即環介導等溫擴增（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP），是由日本科學家 Notomi 等人在2000年開發的一項適用于基因診斷的恒溫核酸擴增技術，其使用具有鏈置換特性的DNA聚合酶，通過2-3對基因特異性引物，在等溫條件下（通常為 60-65°C）快速擴增靶標序列。與傳統的 PCR 技術相比，LAMP 技術具有操作簡單、擴增速度快、對設備要求低等優點，特別適合資源有限的現場檢測和即時診斷。目前LAMP技術已從實驗室逐漸走向檢驗一線，覆蓋包含臨床傳染病檢測、疫情防控、海關檢疫、食品與藥品安全檢測、環境監測等各種領域。

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LAMP技術難點

自2000 年首次報道后，LAMP并未像PCR一樣被全世界的生物實驗室廣泛使用，除開其技術專利問題，主要有兩方面的原因：其一LAMP的引物設計比較復雜，部分靶標在有限的擴增區域內，很難設計出幾組合適的引物，騰挪空間太小。其二，由于其擴增迅速，很容易出現非特異擴增，導致假陽性結果。

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翌圣生物解決方案

1、引物設計，推薦在線引物設計軟件http://primerexplorer.jp/e/ ，每個靶標選擇2-3套引物在LAMP實驗中進行測試篩選，同時，引入環狀引物加快反應速度。

2、非特異擴增，推薦翌圣生物最新升級的熒光染料法RT-LAMP試劑（Cat#16729/16730），其采用新一代適配體封閉的Bst Plus DNA Polymerase，搭配精細優化的緩沖體系，實現高效快速和高特異性的擴增，并且可支持室溫配置反應體系。

產品介紹

熒光染料法RT-LAMP試劑

LAMP擴增檢測結果主要分為兩種方式: 終點法（瓊脂糖凝膠電泳法、比濁法、目測法等）和實時熒光法（染料法、探針法等）。熒光染料法RT-LAMP是將熒光染料（如SYBR Green、Syto等）作為熒光標記物，在擴增反應中與雙鏈DNA結合后，熒光信號會增強800-1000倍。使用熒光定量PCR儀在60-65℃恒溫條件下進行測試，約30min后即可通過擴增結果判斷是否感染病原體，還可搭配微流控芯片或便攜式檢測儀快速檢測。

圖1. LAMP擴增流程

推薦產品

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RT-LAMP Fluorescent Assay Kit(Bst Plus)（16729ES）

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RT-LAMP Lyo-Ready Fluorescent Assay Kit(Bst Plus)（16730ES）-可凍干

產品特點

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通用性

驗證20多對動物和人相關的病原靶標，GC含量30%-65%，陽性出峰時間與市面上同類產品相當。

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特異性

驗證多組DNA和RNA靶標，特異性均優于市面同類產品，60min內NTC無非特異起峰，或出峰時間晚于競品。03

靈敏度

檢測真實樣本提取的非洲豬瘟核酸，靈敏度可達15拷貝/反應；檢測乙型流感病毒質控品，靈敏度可達10拷貝/反應。

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穩定性

反復凍融20次性能不受影響；37℃熱加速7天性能不受影響；支持室溫配置反應體系。

性能展示

1、在多個LAMP和RT-LAMP體系、不同模板濃度下，對比測試翌圣16729、16730和Supplier A的擴增性能，結果顯示：在不同體系下，16729/16730的擴增性能與Supplier A無顯著差異，且特異性更好。

2、采用真實樣本提取的非洲豬瘟樣本核酸，以及乙型流感病毒質控品，用數字PCR定量模板濃度后，測試16729/16730的檢出情況，檢出定義為30min以內起峰，結果顯示16729/16730檢測靈敏度優異。

3、在多個LAMP、RT-LAMP體系中，同時測試16729/16730反復凍融、熱加速后的試劑與-20℃正常保存試劑（T0）的性能，結果顯示：16729/16730反復凍融20次、37℃ 放置7天后，陽性檢出不受影響，且無非特異擴增，產品穩定性好。

翌圣生物在酶原料領域深耕多年，長期為IVD企業、第三方檢驗機構、科研機構等提供高品質、高性價比的分子診斷原料，包括逆轉錄酶、Taq DNA Polymerase、Bst DNA Polymerase、Bsu DNA Polymerase、抗體、dNTPs等單組份以及經過體系優化的qPCR、LAMP、RPA等預混液，可為臨床/非臨床診斷試劑盒開發提供性能優越、穩定的酶原料。

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