目前血清維生素D檢測方法主要為液相色譜-串聯質譜法（LC-MS/MS）和化學發光免疫分析（CLIA）。國家衛生行業標準《WS/T 677—2020 人群維生素D缺乏篩查方法》推薦LC-MS/MS為第一方法，化學發光免疫法為第二檢測方法。從原理上看，LC-MS/MS是基于被測生物標志物本身分子量、結構等化學性質的直接分析方法，具有高靈敏度和高特異性。CLIA是基于抗原抗體反應，與LC-MS/MS相比，前處理簡單且檢測自動化程度高。

LC-MS/MS

液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）是臨床生化小分子檢測的首選方法，常用于血清25-羥維生素D（25-OH-VD）的檢測。LC-MS/MS結合了液相色譜（LC）的物理分離能力和質譜（MS）質量分析能力，可對未知化合物進行定性和定量分析。LC-MS/MS二級串聯質譜分析技術，可同時利用母離子及碎片離子信息，選擇性地監測被定量的化合物，即使是痕量的組分也不受豐量物質的干擾。對于小分子分析測定來說，LC-MS/MS具有很高的分析特異性和和檢測靈敏度。

美中不足的是，LC-MS/MS分析結果易受樣本中目標分析物以外的物質（包括來源于樣本自身及方法建立過程中外部環境引入的物質）影響。為消除這種基質效應，提高LC-MS/MS分析結果的準確性，樣品需要進行嚴格的前處理。對與尿液、口腔液、血漿等不同臨床驗本中的小分子進行檢測時，需要根據基質凈化效果、樣品預期濃度、最低檢出限要求等因素選擇不同的前處理方式，以消除不同物質帶來的基質效應。

化學發光競爭免疫檢測

與LC-MS/MS相比，基于抗原-抗體特異性結合的免疫檢測技術操作簡單、檢測快速，是VD小分子質譜檢測切實可行的替代方法。由于25-OH-VD分子量小，缺乏抗原表位，目前臨床化學發光免疫檢測普遍采用的是競爭法。競爭法屬于試劑有限型分析，檢測靈敏度相對較低；交叉反應率較高，易出現假陽；在痕量檢測時難以與陰性樣本區分，在樣本低濃度范圍會產生較大的誤差。大量研究顯示，VD競爭法與質譜檢測結果的相關性較差，盡管有化學發光的加持，檢測結果也不盡如人意。

中國醫學科學院北京協和醫院檢驗科與中日友好醫院檢驗科血凝室的研究人員液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）方法作為參照標準，比較了雅培、索林、IDS、羅氏、西門子5個廠家的自動化免疫學方法和測定25-OH-VD結果的一致性，結果顯示不同檢測系統檢測結果相差較大。

小分子非競爭免疫檢測技術與質譜相關性高達0.94

為解決免疫檢測技術在小分子臨床應用的技術難題，提高免疫檢測與質譜檢測結果的一致性，OKAYBIO研發團隊不斷實踐、反復嘗試，最終通過調整免疫策略、優化抗體設計，成功開發出適用于小分子非競爭免疫分析的抗體。