?基本信息

貨號：22204

儲存條件：-20℃避光干燥

保質期：自收到起6個月

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簡介

盡管JC-1在許多實驗室中被廣泛使用，但其水溶性差使得它在某些應用中難以使用。即使在1μM濃度下，JC-1也傾向于在水性緩沖液中沉淀。當需要高染料濃度時，JC-10已被開發為JC-1的替代物。與JC-1相比，我們的JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能夠選擇性地進入線粒體，并隨著膜電位的增加可逆地將其顏色從綠色變為橙色。這種性質是由于膜極化時JC-10聚集體的可逆形成導致發射光從520nm（即JC-10單體形式的發射）轉變為570nm（即J-聚集體形式的發射）。當在490nm激發時，隨著線粒體膜變得更加極化，JC-10的顏色從綠色橙色可逆地變為綠色橙色。使用通常安裝在所有流式細胞儀中的過濾器可以檢測兩種顏色。可以在熒光通道1（FL1）中分析綠色發射，在通道2（FL2）中分析綠色橙色發射。除了用于流式細胞儀外，JC-10還可用于熒光成像。我們已經開發出一種在熒光微孔板平臺中使用JC-10的方案。在一些細胞系中，JC-10具有甚至優于JC-1的性能。

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物理化學特性

分子量：~600

儲存方式：DMSO

Ex=515nm

Em=529和527nm

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JC-10的分析方案

簡要概括

準備含有測試化合物的細胞?

添加JC-10工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）?

在室溫或37 ℃孵育1小時?

在Ex讀取熒光強度 / Em = 490 / 525nm和540 / 590nm

注意：以下是我們推薦的活細胞方案。 該協議僅提供指南，應根據您的特定需求進行修改。

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操作步驟

1.?準備JC-10工作溶液：

1.1每瓶DMSO原液（100μL，2?mg?/?mL，3?mM）只能使用一次。任何未使用的小瓶應儲存在<-20℃。注意：避免反復凍融循環，并避光.

1.2準備1X?JC-10工作溶液：在實驗當天，解凍一份JC-10?stockolution到室溫。在Hanks和20?mM?Hepesbuffer（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH?7-8，含0.02％Pluronic?[表情]?F-127）中制備10至30μM1X工作溶液。通過votexing將它們混合均勻。注意：對于某些細胞系，pH值為8的工作溶液可能會阻止JC-10泄漏。

2.用熒光酶標儀進行JC-10檢測：

2.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間（例如，Jurkat細胞可以用喜樹堿處理4-6小時）以誘導細胞凋亡。 對于空白孔（沒有細胞的培養基），加入相應量的化合物緩沖液。

2.2將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-10工作溶液（來自步驟1.2）加入到細胞板中。

2.3將JC-10加載板在37 oC，5％CO2培養箱中孵育15-60分鐘。

注意：適當的孵育時間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。

2.4監測Ex / Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/590 nm（TRITC通道）的熒光變化，進行比率分析。

可選：從板上取下JC-10工作溶液; 在分析之前，將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到細胞板中。

3.用熒光顯微鏡或流式細胞儀進行JC-10檢測：

3.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間（例如，Jurkat細胞可以用喜樹堿處理4-6小時）以誘導細胞凋亡。

3.2離心細胞，每管取1-5×105個細胞。

3.3將細胞重懸于500μLJC-10工作溶液中（來自步驟1.2）。

3.4在室溫或37°C，5％CO2培養箱中孵育10至30分鐘，避光。

注意：適當的孵育時間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。

3.5使用熒光顯微鏡（使用FITC和TRITC過濾器）或流式細胞儀（使用FL1和FL2通道）監測Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm處的熒光變化。可選：移除JC-10工作 從板上解決; 在熒光顯微鏡下分析之前，將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到細胞板中。

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