LysoBrite 橙色，紅色，深紅色和NIR試劑具有很高的光穩定性和優異的細胞保留性，可用于各種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。 它們適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。溶酶體是細胞器，其含有酸水解酶以分解廢物和細胞碎片。 溶酶體消化多余的或破舊的細胞器，食物顆粒和吞噬的病毒或細菌。 溶酶體周圍的膜允許消化酶在pH4.5下工作。 與微堿性胞質溶膠（pH 7.2）相比，溶酶體的內部是酸性的（pH 4.5-4.8）。 溶酶體通過質子泵和氯離子通道從細胞質中泵送質子穿過膜來維持這種pH差異。LysoBrite 溶酶體熒光探針是美國AAT Bioquest研發的產品。

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實驗方案

使用LysoBrite 染料的分析方案

概述

準備細胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分鐘

洗滌細胞

在熒光顯微鏡下分析

注：該方案僅提供指南，應根據您的具體需求進行修改。

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操作方法

1.制備溶酶體染色溶液：

1.1解凍 LysoBrite 染料至室溫。

1.2通過將20μL的500 X LysoBrite 染料稀釋到10 mL Hanks和20 mm Hepes緩沖液或緩沖液（HBSS）中，制備染料工作溶液。

注1：對于一個96孔板，20μL的LysoBrite 染料就足夠了。 在<-15℃下等分并儲存未使用的LysoBrite 染料儲備溶液。 保護它免受光照，避免反復凍融循環。

注2：熒光溶酶體指示劑的濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1貼壁細胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。 b.將細胞在37℃，5％CO2培養箱中孵育30分鐘。 c.用預熱（37℃）Hanks和20mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液洗滌細胞兩次，用HBSS或生長培養基填充細胞孔。 d.使用配有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：a.將等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）加入細胞中。將細胞在37℃，5％CO2培養箱中孵育30分鐘。 b.用預熱（37℃）Hanks和20mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液洗滌細胞兩次，用HBSS或生長培養基填充細胞孔。 c.使用配備有所需過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。

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