1.?百螢Annexin V-iFluor 700標記簡介及應用

Annexin V是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的磷脂酰絲氨酸（PS）高親和力特異性結合。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。用標記了熒光素的Annexin V作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。

Annexin V-iFluor 700標記是美國AAT Bioquest研發的用于檢測細胞功能的探針，膜聯蛋白是鈣依賴性磷脂結合蛋白家族。 它們富含真核生物，屬于參與信號轉導的普遍存在的細胞質蛋白家族。 膜聯蛋白V的優先結合配偶體是磷脂酰絲氨酸（PS），其通常保持在細胞膜的內葉（細胞質側）。 在細胞凋亡中，PS被轉移到質膜的外部小葉。 磷脂酰絲氨酸在細胞表面上的出現是細胞凋亡的初始/中間階段的通用指示，并且可以在觀察到形態變化之前檢測到。 我們的膜聯蛋白V結合物是一組監測細胞功能的工具，旨在通過測量磷脂酰絲氨酸的易位來監測細胞凋亡。

膜聯蛋白V結合物在Ca2+存在下與凋亡細胞表面上的PS結合，它也可以通過壞死細胞膜或死細胞并與細胞內部的PS結合。 因此，我們建議將細胞不可滲透的核染色與膜聯蛋白V結合物結合使用，以區分死細胞和凋亡細胞。?

2.?Annexin V-iFluor 700標記參數

E x (nm) ???????690

E m (nm) ?????713

分 子 量 ?????～36000

溶 ???劑 ?????Water

存儲條件? ? ?在零下15度以下保存，避免光照

3.?適用儀器

（1）流式細胞儀

E x:640nm

E m:730/45nm

通道:Alexa Flour-700通道

（2）熒光顯微鏡

???推薦孔板：黑色透明底板

4.?數據分析

下圖是使用流式細胞儀檢測膜聯蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸在Jurkat細胞凋亡中的結合活性的實例。 在活的非凋亡細胞中，膜聯蛋白V-mFluor Violet 450檢測非誘導細胞中的先天性細胞凋亡，其通常為所有細胞的2-6％。 在凋亡細胞中，膜聯蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸結合，磷脂酰絲氨酸位于細胞膜的外部小葉上，導致染色強度增加。

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圖1.在Jurkat細胞中檢測膜聯蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰絲氨酸的結合活性。 將Jurkat細胞在37℃，5％CO2培養箱中不用（藍色）或用1μM星形孢菌素（紅色）處理5小時，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分鐘。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細胞儀，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下測量膜聯蛋白V-mFluor Violet 450的熒光強度。