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導(dǎo) 語

腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥治療的最大挑戰(zhàn)之一，而細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)是研究癌細(xì)胞遷移能力的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”！如何利用基質(zhì)膠精準(zhǔn)構(gòu)建體外侵襲模型？實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵步驟與試劑如何選擇？翌圣生物本期技術(shù)專欄為您揭曉答案！

PART.01

細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)通過模擬癌細(xì)胞穿透基底膜的過程，評(píng)估其遷移與侵襲能力，廣泛應(yīng)用于抗腫瘤藥物篩選、轉(zhuǎn)移機(jī)制研究及靶向治療開發(fā)。實(shí)驗(yàn)中，基質(zhì)膠（如翌圣生物Ceturegel^®基質(zhì)膠）作為基底膜替代物，為細(xì)胞提供三維微環(huán)境，結(jié)合Transwell小室形成物理屏障，通過量化穿透基質(zhì)的細(xì)胞數(shù)評(píng)估侵襲性。

實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢(shì)：

? 高靈敏度：可檢測(cè)微量藥物對(duì)侵襲的抑制作用

? 可視化強(qiáng)：通過染色直接觀察侵襲細(xì)胞

? 適用性廣：支持多種腫瘤細(xì)胞

圖1.細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)過程

PART.02

實(shí)驗(yàn)步驟

首先將拿到的Ceturegel^®基質(zhì)膠凍融后按照原液1:8稀釋（終濃度不要超過3 mg/mL）來包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃、30 min - 8 h使基質(zhì)膠聚合成凝膠，使用前用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行基底膜水化30 min。

將細(xì)胞饑餓12 - 24 h以去除血清的影響。

消化細(xì)胞，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液并用PBS洗1 - 2次，用含無血清培養(yǎng)基重懸調(diào)整細(xì)胞密度至4×10⁴~5×10⁵個(gè)/mL 。。

取細(xì)胞懸液100 μL加入Transwell小室。

在24孔板下室加入600 μL含20%FBS培養(yǎng)基，添加時(shí)要避免下層培養(yǎng)液和小室間產(chǎn)生氣泡，產(chǎn)生氣泡易使下層培養(yǎng)液的趨化作用減弱甚至消失。

培養(yǎng)細(xì)胞:常規(guī)培養(yǎng)12 - 48 h(時(shí)間主要依癌細(xì)胞侵襲能力而定)。

取出Transwell小室，棄去孔中培養(yǎng)液，用不含鈣的PBS清洗2遍，4%多聚甲醛固定10 - 30 min，將小室適當(dāng)風(fēng)干。

使用0.1%結(jié)晶紫染色5 - 20 min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞，用PBS洗3遍于顯微鏡下隨即5個(gè)視野觀察細(xì)胞，記數(shù)。

PART.03

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2.細(xì)胞侵襲后經(jīng)結(jié)晶紫染色的結(jié)果

PART.04

常見問題及解答

細(xì)胞不轉(zhuǎn)移？

QA

①細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力比較弱。
②基質(zhì)膠濃度不佳鋪的太厚，需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索。
③細(xì)胞給的量少可嘗試增加細(xì)胞數(shù)量。
④細(xì)胞沒有用PBS洗1-2 遍，用胰酶消化后，必須將含血清的培養(yǎng)基洗去。
⑤細(xì)胞的活性太差，活性不好的細(xì)胞做侵襲實(shí)驗(yàn)難度較大。

染色后細(xì)胞分布不均一？

QA

①小室未平衡放置于孔板中。

②細(xì)胞懸液加入時(shí)局部過多。

③小室有傾斜或晃動(dòng)。

④小室本身滲透膜不平。

PART.05

產(chǎn)品詳情