繼單細胞測序技術取得革命性突破后，單細胞蛋白質組學技術也飛快發展，已實現高通量高深度的檢測。功能分子蛋白質層面的深度解析使得單細胞的研究更加完整，更加多元化，但這項技術猶如天山上的雪蓮，可望而不可即。
3月24日下午，我們誠邀UE-SCP單細胞蛋白質組學技術的開發者——上海交通大學醫學院李辰老師、中科新生命高級研發專家李紫藝博士、布魯克蛋白質組學和生物制藥應用經理劉先明，以及中科新生命蛋白線產品經理為大家帶來一場精彩紛呈的單細胞蛋白質組學技術與應用論壇，全面講解了單細胞蛋白質組學的技術發展歷程，UE-SCP技術流程及優勢，讓大家對這項新興技術有了更加深刻的認識。
今天小編根據這場講座總結了這項技術的一些核心問題來跟大家分享。
Q1 單細胞蛋白質組學分析流程概述
以組織為例，新鮮組織需保存于組織保護液中，4℃ 48h內送達實驗室進行組織解離，制成單細胞懸液，細胞活率與數量達標情況下分選單個細胞至低吸附耗材中，完成蛋白提取與酶解、脫鹽等一系列前處理操作后上機檢測，得到每個細胞的蛋白質定性和定量數據，再進行生信分析。
圖1 單細胞蛋白質組學實驗流程
Q2 單細胞蛋白質組的技術難度在哪里？
單細胞蛋白質組最大的難點在于常規單個細胞內蛋白質含量僅pg級，且無法擴增。
Q3 基于質譜的單細胞蛋白質組優勢是什么？與基于抗體標記的單細胞蛋白質分析方法有什么區別？
基于抗體標記的單細胞蛋白質分析是一種依賴于抗體的、受限于抗體可用數，僅可以靶向檢測單個細胞內幾個到幾十個蛋白質的方法，且可能存在光譜重疊的問題；而基于質譜的蛋白蛋白質組是非靶向的，可以高深度地對單細胞內的蛋白質進行檢測，是一種發現型的研究，適用于機制的解析。
Q4 單細胞轉錄組技術已經非常成熟了，還有必要做單細胞蛋白質組嗎？
基因的表達分為轉錄和翻譯兩個層面，即mRNA水平和蛋白水平。而真核基因表達的轉錄和翻譯發生的時間和位點存在時空間隔；其次在轉錄后，又會有轉錄后加工，轉錄產物的降解，翻譯，翻譯后加工及修飾好幾個層面。所以mRNA豐度與蛋白質豐度并不完全一致。蛋白質作為生理功能的執行者，對蛋白質的研究將直接闡明生命在生理或病理條件下的變化機制。
Q5 現在的單細胞蛋白質組技術可以檢測到多少蛋白質？最多可以檢測多少細胞？
不同物種來源不同組織類型，鑒定深度會有所差異。一般情況下，單個細胞蛋白質鑒定數量達1500+?，F一周可檢測300個細胞，預計不久后可實現一周1000個細胞檢測。
Q6 這項技術可靠嗎？數據穩定嗎？
1：比較批次間的數據可知不同批次間鑒定到的蛋白質數量較為穩定，且重復性高；
2：比較所有細胞間的數據可知細胞間具有良好的平行性和優異的相關性。
圖2 單細胞蛋白質組學數據質量評估
圖3 carrier相關性評估
Q7 單細胞蛋白質組可以和單細胞轉錄組進行聯合嗎？
可以。更加推薦通過單細胞轉錄組找到關鍵細胞類型后，再通過單細胞蛋白質組進一步分群及功能解析(具體應用思路下期軟文發布，大家可以期待一下)。
Q8 單細胞蛋白質組可應用于哪方面的研究？
1：應用于稀有細胞的分析；
2：處于不同分化階段的細胞或誘導分化的細胞分析；
3：應用于腫瘤異質性、免疫、生殖發育等研究。
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