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干貨 | 限制性內切酶知多少?

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2022-06-09T13:28 (訪問量:3349)

干貨 | 限制性內切酶知多少?


何謂限制性內切酶?


限制性內切酶是一種能夠識別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列,并在特定位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶,簡稱限制酶。

不同的限制性內切酶會識別不同的DNA序列,它可以在識別序列內或距識別序列不遠的位置處切割DNA,酶切之后會形成不同類型的產物,如下圖中的BamHI形成5’粘性末端產物,KpnI形成3’粘性末端產物,EcoRV形成平末端產物。

1213.jpg

▲ BamHI、KpnI、EcoRV酶切示意圖

眾所周知,限制性內切酶最常用于分子克隆實驗中。但除了克隆,它還可以應用于疫苗研發生產、基因測序、SNP鑒定、ddPCR等領域。

限制性內切酶的命名規則


限制性內切酶的命名主要是根據細菌的屬名、種名、菌株或血清型、發現的順序而定,以BstEII為例,命名規則如下表所示:
表1:限制性內切酶的命名規則

縮寫

全名

含義

B

Bacillus

屬名第一個字母

st

stearothermophilus

種名前兩個字母

E

ET

株系名第一個字母

II

第二個發現

在此類細菌中發現的順序


限制性內切酶的分類


根據結構的復雜程度、作用方式與輔因子的區別,限制性內切酶可分為四大類,以下內容總結了各類的特點和典型酶種:

1

Type Ⅰ

? 特點

1.同時具有識別切割和修飾活性;
2.能夠識別DNA特定序列,切割位點距離識別位點不定,可達數千個堿基之遠;
3.作用時需要ATP。

? 典型酶種:EcoB、Ecok等

2

Type Ⅱ

? 特點

1.只具有識別切割的作用;
2.識別序列多為短的回文序列(一般為4-8bp),酶切位點通常就是所識別序列,特異性切割;
3.作用時需要Mg
2+;
4.分子克隆中最常用的一類限制酶。

? 典型酶種:HindII、NotI等

3

Type Ⅲ

? 特點

1.同時具有識別切割和修飾活性;
2.切割位點大約距離識別位點24-26bp;
3.作用時需要ATP。

? 典型酶種:Hinflll等

4

Type Ⅳ

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