在 DNA - 蛋白質(zhì)互作研究的 “江湖” 里，有一款超牛的技術(shù) ——Multi-CUT&Tag ！它憑借獨特的優(yōu)勢，迅速成為科研 er 們探索生命奧秘的得力助手，今天就帶大家一探究竟！
技術(shù)原理超硬核
傳統(tǒng)研究 DNA - 蛋白質(zhì)互作的方法或多或少存在一些局限，而 Multi-CUT&Tag 技術(shù)則另辟蹊徑！它巧妙地利用 Tn5 轉(zhuǎn)座酶和特異性抗體。抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合后，引導(dǎo) Tn5 轉(zhuǎn)座酶精準(zhǔn)定位到 DNA - 蛋白質(zhì)互作位點，然后 Tn5 轉(zhuǎn)座酶對 DNA 進行切割并添加測序接頭，直接高效地捕獲互作信息。相比于傳統(tǒng)的 ChIP-seq，Multi-CUT&Tag 無需超聲破碎，大大減少了樣本損耗，還能降低背景信號干擾，讓研究結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠！
應(yīng)用場景超豐富
01
神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域
2022 年 12 月，Gonçalo Castelo - Branco 課題組在《Nature Biotechnology》上發(fā)表研究 ，通過 anti - mouse Tn5 和 anti - rabbit Tn5，針對鼠抗和兔抗在鼠腦中實現(xiàn)特異性的 Multi - CUT&Tag 技術(shù)應(yīng)用。此研究非常詳細(xì)地剖析大腦中的祖細(xì)胞如何特化成少突膠質(zhì)細(xì)胞，為我們在疾病背景下如何刺激少突膠質(zhì)細(xì)胞群的恢復(fù)提供線索，幫助我們深入了解大腦神經(jīng)細(xì)胞的分化機制。
02
免疫學(xué)研究
美國紐約基因組中心 Ivan Raimondi 團隊于 2022 年 12 月在《Nature Biotechnology》發(fā)表成果 ，在不同免疫細(xì)胞，如 PBMCs 和 BMMCs 中，使用納米抗體偶聯(lián)的 Tn5 酶實現(xiàn)了單細(xì)胞多靶標(biāo)的 CUT&Tag 研究。不僅獲得了高分辨率的多模態(tài)圖，還擴展了技術(shù)，能同時分析細(xì)胞表面蛋白表達和多模態(tài)染色質(zhì)狀態(tài)，極大推動了免疫系統(tǒng)細(xì)胞的研究進展。03
發(fā)育生物學(xué)
在研究細(xì)胞分化和發(fā)育過程中，Multi - CUT&Tag 可同時檢測多種染色質(zhì)特征的變化，助力了解基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在單細(xì)胞水平如何協(xié)調(diào)細(xì)胞發(fā)育命運。相關(guān)研究成果可參考發(fā)表于《Nature Protocols》的論文 “Multi - CUT&Tag to simultaneously profile multiple chromatin proteins” 。該研究展示了 Multi - CUT&Tag 在小鼠胚胎干細(xì)胞和滋養(yǎng)層干細(xì)胞中的應(yīng)用，為探究胚胎發(fā)育早期細(xì)胞分化機制提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù) 。
產(chǎn)品優(yōu)勢超給力
01
多靶標(biāo)同時檢測
Multi-CUT&Tag 最大的亮點之一就是能夠同時檢測多個蛋白質(zhì)與 DNA 的互作。一次實驗就能獲取多種蛋白質(zhì)的結(jié)合信息，不僅節(jié)省了大量的樣本、時間和實驗成本，還能更全面地解析復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，讓研究效率直線飆升！
02
超高靈敏度與特異性
得益于獨特的酶切和標(biāo)記方式，即使是微量樣本，Multi-CUT&Tag 也能精準(zhǔn)捕獲 DNA - 蛋白質(zhì)互作信號。并且，它對目標(biāo)位點的識別特異性極高，能夠有效區(qū)分特異性結(jié)合和非特異性結(jié)合，確保研究數(shù)據(jù)真實有效，為科研成果保駕護航。
03
操作簡便易上手
翌圣全球首發(fā)的 Multi-CUT&Tag 試劑盒配套完善（貨號12592ES），包含了實驗所需的各種關(guān)鍵試劑。科研人員只需按照標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程，準(zhǔn)備好樣本和簡單的實驗設(shè)備，就能輕松開展實驗。即使是實驗新手，也能快速掌握，大大降低了技術(shù)門檻。
表1.翌圣Multi-CUT&Tag試劑盒組分原理
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組分名稱 |
組分原理 |
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BOX-I |
ConA Beads |
ConA beads為包被了伴刀豆球蛋白A的磁珠，結(jié)合細(xì)胞膜糖蛋白，從而捕獲細(xì)胞 |
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DNA Extract Beads |
提取DNA的磁珠 |
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DNA Selection Beads |
DNA純化及分選磁珠 |
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BOX-II |
10 x Binding Buffer |
細(xì)胞捕獲緩沖液 |
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10 x Wash Buffer |
細(xì)胞洗滌緩沖液 |
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5% Digitonin |
增加細(xì)胞膜通透性，在細(xì)胞表明打孔，便于后續(xù)轉(zhuǎn)座切割 |
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50 x PB Buffer |
抗體結(jié)合緩沖液 |
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10 x Dig-300 Buffer |
轉(zhuǎn)座酶結(jié)合緩沖液 |
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Anti-mouse Tn5 |
偶聯(lián)抗鼠二抗的Tn5復(fù)合體 |
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Anti-rabbit Tn5 |
偶聯(lián)抗兔二抗的Tn5復(fù)合體 |
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33 Activating Buffer |
含鎂離子，激活Tn5轉(zhuǎn)座活性 |
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15 x Terminate Solution |
終止轉(zhuǎn)座酶活性，同時裂解細(xì)胞，釋放DNA |
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30 x Proteinase K |
消化蛋白質(zhì)，釋放蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA |
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DNA Spike-in Mix (5 ng/μL) |
來源于Ecoli.的三段序列，用于后續(xù)分析的標(biāo)準(zhǔn)化 |
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2xHiFi Amplification Mix |
文庫擴增酶 |
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i5 Universal Primer |
文庫接頭 |
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i7 Index Primer (T701) |
文庫接頭，含測序index |
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這么寶藏的 DNA - 蛋白質(zhì)互作研究利器，真的太香了！無論是基礎(chǔ)科研，還是應(yīng)用研究，Multi-CUT&Tag 都能大顯身手。還在為 DNA - 蛋白質(zhì)互作研究發(fā)愁的寶子們，趕緊碼住，說不定下一個科研突破就靠它啦！
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