中文名稱： ?Helixyte Green 熒光 ssDNA 定量試劑盒 *針對酶標儀進行了優化*
英文名稱： Helixyte? Green Fluorimetric ssDNA Quantitation Kit *Optimized for Microplate Readers*
產品貨號： ?17623
產品規格： ?200 Tests
供 貨 商： ?AAT Bioquest
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產品參數
Ex (nm) ????498
Em (nm)?????519
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產品概述
Amplite 熒光 ssDNA 定量試劑盒以簡單準確的方式來檢測單鏈 DNA。該試劑盒包含所有基本試劑，包括 Helixyte Green ssDNA 試劑、稀釋緩沖液和預稀釋的 DNA 標準品。 Helixyte Green ssDNA 試劑是一種靈敏的熒光核酸探針，用于定量溶液中的寡核苷酸和單鏈 DNA (ssDNA)。它使科研人員能夠量化低至 100 pg/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。這種靈敏度超過吸光度方法的 10,000 倍以上。使用該試劑盒，可檢測低至 1 ng/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。使用該試劑盒對一些 ssDNA 進行了定量，包括具有相似靈敏度的 M13 和 φX174 病毒 DNA 以及變性小牛胸腺 DNA。它們的檢測限不受核酸制劑中常見污染物的明顯干擾，包括鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去污劑、蛋白質、ATP、核苷酸和六堿基短寡核苷酸等。然而，雙鏈 DNA (dsDNA) 和 RNA 確實會干擾檢測，因為 Helixyte Green ssDNA 試劑會與 dsDNA 和 RNA 結合以產生熒光信號。 Amplite 熒光 ssDNA 定量試劑盒經過優化，可使用熒光酶標儀定量 dsDNA。
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適用儀器
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熒光酶標儀?
Ex:490 nm
Em：525 nm
Cutoff：515 nm
推薦孔板:純黑色孔板?
實驗方案
概述
1.添加 100 μL ssDNA 標準品或測試樣品
2.添加 100 μL Helixyte Green ssDNA 工作溶液
3.在室溫下孵育 5-10 分鐘
4.檢測 Ex/Em=490/525 nm 處的熒光強度
注：以下方案是使用 Helixyte Green ssDNA 定量總核酸含量的示例。 打開前讓所有成分升溫至室溫。 目前沒有發現關于 Helixyte Green ssDNA 染色劑的致突變性或毒性的數據。 由于該試劑與核酸結合，因此應將其視為潛在的誘變劑并小心處理。 應特別小心處理 DMSO 原液，因為已知 DMSO 可促進有機分子進入組織。?
溶液制備
ssDNA 標準溶液
將 10 uL 100 ug/mL ssDNA 標準溶液（組分 C）添加到 190 uL 檢測緩沖液（組分 B）中以獲得 5 ug/mL 標準溶液，然后進行 1:3 稀釋以獲得連續稀釋的 ssDNA 標準溶液（SS2- SS7）。請使用AAT Bioquest連續稀釋計算器以方便數據處理。
Helixyte Green ssDNA 工作溶液
將 100 μL Helixyte Green ssDNA（組分 A）加入 10 mL 檢測緩沖液（組分 B）中，制備 Helixyte Green ssDNA 工作溶液。 通過用箔紙覆蓋或將其置于黑暗中來保護工作溶液免受光照。
注意：建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備工作溶液，因為染料可能會吸附到玻璃表面。為獲得效果，該溶液應在稀釋后幾小時內使用。
注意：10 mL 的工作溶液對于一個 96 孔板就足夠了。
操作步驟
表 1. 純黑色 96 孔板中 ssDNA 標準品和測試樣品的布局。 SS= ssDNA 標準品（SS1 - SS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白控制； TS=測試樣品
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表2.各孔試劑組成
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1.根據表 1和表 2 中提供的布局準備 ssDNA 標準 (NS)、空白對照 (BL) 和測試樣品 (TS)。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑，而不是 100 μL。
2.將 100 μL Helixyte Green ssDNA 工作溶液加入 ssDNA 標準品、空白對照和測試樣品的每個孔中，使測定體積為 200 μL/孔。 對于 384 孔板，將 25 μL 的 Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每個孔中，以獲得 50 μL/孔的總體積。
3.在室溫下孵育反應 5 到 10 分鐘，避光。
4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm 處）的熒光酶標儀檢測熒光增加。
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圖示
圖 1. ssDNA 劑量反應是在 96 孔黑色孔板中使用 Amplite Fluorimetric ssDNA 定量試劑盒測量的。
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