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反轉錄是將RNA轉錄成互補DNA (cDNA) 的過程，該反應由反轉錄酶介導完成。在有退火引物的情況下，反轉錄酶首先與 RNA 模板結合。反轉酶的RNA依賴性 DNA 聚合酶活性通過摻入反應混合物中的dNTP來合成cDNA，反應生成得到 cDNA:RNA 雜合鏈，此過程被稱為第一鏈 cDNA 合成。
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莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 反轉錄酶是分子生物學實驗流程中常見的反轉錄酶之一。為了獲得更高的反轉錄效率、更好的熱穩定性和更高的 cDNA 合成率，通常會對原始的反轉錄酶進行基因工程改造。目前市面上的反轉錄試劑所需要的反轉錄時間普遍從15分鐘到30分鐘不等，時間相對較長，當反應樣本量較大時，整體花費時間量也會急劇上升。翌圣生物現有的5分鐘反轉錄系列產品，在5分鐘內即可完成反轉錄，省時高效。
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精品推薦一???
5分鐘一步消化&反轉錄預混液(Cat #11151ES)
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產品特點
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一步完成：一步完成gDNA去除和反轉錄；
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快速反應：消化&反轉僅需5分鐘；
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高效合成：可保證100 pg RNA反轉錄；
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產物穩定：cDNA產物可長久穩定保存；
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性能展示
??反轉錄產量高??
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圖. 以人293T細胞RNA為模板，分別檢測三種基因。品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉錄試劑。測試結果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉錄的產量均優于其他品牌，Ct值更小。
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圖. 以擬南芥RNA為模板，品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉錄試劑。測試結果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉錄的產量均優于其他品牌，Ct值更小。
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?優異的靈敏度????
圖. 以人293T細胞RNA為模板，擴增30%GC、50%GC、60%GC和70%GC的基因。分別投入100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg的Total RNA進行反轉錄并進行熒光定量檢測。結果顯示，11151ES可滿足100 pg-1 μg RNA的反轉錄。
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?cDNA產物穩定性好??
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圖.以人293T細胞RNA為模板進行反轉錄，將獲得的cDNA產物進行反復凍融，分別凍融10次、20次、30次。測試結果顯示11151ES反轉錄得到的cDNA產物在30次反復凍融處理后，仍保持高度的穩定性，Ct值差異不大。
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圖. 以人293T細胞RNA為模板進行反轉錄，將獲得的cDNA產物在-20℃、4℃、25℃和37℃的溫度條件下放置7天。測試結果顯示11151ES反轉錄得到的cDNA產物在不同溫度下存儲7天，仍保持高度的穩定性，Ct值差異不大。
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客戶用戶體驗
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樣本來源：人肝臟組織總RNA
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樣本來源：胃黏膜細胞RNA
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樣本來源：小鼠胰島素瘤細胞RNA
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精品推薦二???
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產品特點
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快速反轉：最快5分鐘左右即可完成第一鏈cDNA合成；
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檢出率高：10 pg-1 ug的RNA檢出率；
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高效合成：合成效率媲美進口，最長可合成14kb大小的片段；
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適用廣泛：可用于下游PCR或qPCR；
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示蹤便利：示蹤版包含無干擾、可視化藍色示蹤染料，提醒加樣進度。
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性能展示
??快速反轉錄??
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反轉錄時間 |
平均Ct值 |
|
5?min |
21.693 |
|
10 min |
21.589 |
|
15 min |
21.604 |
|
20 min |
21.746 |
|
25 min |
21.756 |
|
30 min |
21.691 |
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圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES進行反轉錄，得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示，不同反轉錄時間處理的Ct值差值在0.2之內。說明產品可在5分鐘內完成反轉錄，反轉效果和長時間反轉效果持平。
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靈敏度高，最低可至10 pg
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圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES進行反轉錄，得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示，RNA 投入量為10 pg-1 μg時，11149ES均可反轉成功，保證定量結果。
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?擴增性能好，最長擴增14 kb片段??
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圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES進行反轉錄，將得到的cDNA進行PCR檢測。結果顯示，11149ES能夠滿足合成1 kb-14 kb長度的cDNA, 后續PCR有一定的適用場景。若需要直接反轉出10kb以上的片段，建議延長反轉錄時間至20-30分鐘，以保證最終片段的獲取。
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?反轉錄效率比對??
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RNA投入量 |
Ct值 |
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11149ES |
進口A品牌 |
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1 μg |
15.2 |
15.5 |
|
100 ng |
18.0 |
18.5 |
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10 ng |
21 |
21.7 |
|
1 ng |
24.5 |
25.1 |
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100 pg |
29.1 |
29.7 |
|
10 pg |
32.7 |
34.3 |
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圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES、進口A品牌進行反轉錄，其中11149ES不進行gDNA去除步驟，將得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示，進口A品牌反轉時間為13分鐘， 11149ES反轉時間為5分鐘，不同產物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進口競品，說明11149ES 5分鐘反轉效率優于或近似進口A品牌的反轉錄效率。
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RNA投入量 |
Ct值 |
|
|
11149ES |
進口B品牌 |
|
|
1 μg |
16.2 |
17.4 |
|
100 ng |
19.0 |
20.5 |
|
10 ng |
22 |
23.8 |
|
1 ng |
26 |
27.9 |
|
100 pg |
31.4 |
33.2 |
|
10 pg |
32.9 |
35.6 |
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圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES、進口B品牌進行逆轉錄，其中11149ES不進行gDNA去除步驟，得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示，進口B品牌反轉時間為20分鐘，11149ES反轉時間為5分鐘，不同量底物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進口B品牌，說明11149ES 5分鐘反轉效率優于或近似進口B品牌的反轉錄效率。
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客戶體驗反饋
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樣本來源：菊花葉片
客戶評價：與某進口品牌效果相似，擴增常規大小的片段效果不錯。
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樣本來源：果*葉片
客戶評價：藍色很好看。
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樣本來源：水稻
客戶評價：與其他反轉錄試劑盒相比，節省加樣時間，節省反轉錄反應時間（其他試劑盒需要15+2 min，本試劑盒只需5 min），后續基因克隆DNA電泳結果證明，本試劑盒反轉效率更高，條帶更亮，所以會更節省PCR使用試劑，節省成本。
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方法 |
分類 |
產品名稱 |
貨號 |
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同Trizol提取 |
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qPCR染料法 |
高靈敏通用型定量預混液(染料法) |
Hieff UNICON??Universal Blue qPCR SYBR Master Mix |
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Hieff??qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox) |
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反轉錄試劑 |
5 分鐘一步消化&反轉錄預混液 |
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5 分鐘快速反轉，最長可滿足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游應用PCR/qPCR)-示蹤版 |
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Hifair??AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit（No Dye） |
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高質量第一鏈cDNA合成預混液，含gDNA去除(下游應用qPCR) |
Hifair??III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
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