在生命科學研究和生物制藥領域，細胞培養是實驗成功的基石。然而，一種肉眼不可見的“隱形殺手”——支原體（Mycoplasma），卻可能悄無聲息地污染細胞，導致實驗結果失真甚至失敗。支原體是目前已知最小、最簡易的原核生物，無細胞壁的特性使其難以被常規抗生素殺滅。它們通過黏附宿主細胞表面，竊取營養并釋放毒素，雖不直接致死細胞，卻會嚴重干擾代謝過程，保守估計全球15%-35%的細胞培養存在支原體污染風險。如何高效預防與清除支原體，成為實驗室亟需解決的難題。
支原體背景信息
定 義
支原體（Mycoplasma）又稱霉形體，是目前發現的最小、最簡單的無細胞壁的原核生物，直徑大小0.1~0.3μm，該大小剛好介于細菌和病毒之間。其能通過濾膜且呈高度多形性，是哺乳動物細胞培養中相對常見且難以檢測的污染物。由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱為支原體。
分 類
支原體（mycoplasma）是細菌中最小的一種微生物，在生物學分類中屬于柔膜菌門、柔膜菌綱，又分屬于不同目科屬。其中研究較多的支原體目、支原體科，主要包含支原體屬、脲原體屬兩個種屬。
圖1.支原體結構圖
常見形態
支原體有多種形態，有球形、桿形、絲狀、分支狀等，通常可以在掃描電鏡和透射電鏡下進行觀察。細胞培養上清和細胞膜是比較適宜支原體生長的；寄生在細胞表面的支原體可以穿透宿主細胞膜。
圖2.支原體形態圖
支原體污染的來源和常見種類
污染的來源
主要為細胞培養液或其成分（如培養基原料、血清和其他試劑）、實驗室操作人員、細胞培養箱、液氮培養箱、空氣中的粒子和氣溶膠、抗生素的過度使用、密封不當的細胞培養物和污染了支原體的細胞等。
圖3.易受支原體污染的來源
常見的污染支原體種類
細胞培養中95%的支原體污染主要是由萊氏無膽甾原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、口腔支原體、發酵支原體、人型支原體這6種常見支原體引起的。
表1.污染支原體種類
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S/N |
支原體 |
主要來源 |
95%常見的細胞培養污染物 |
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1 |
Acholeplasma laidlawii 萊氏無膽甾原體 |
豬、牛、禽類、植物 |
是 |
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2 |
Mycoplasma arginini 精氨酸支原體 |
豬、牛、綿羊、山羊 |
是 |
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3 |
Mycoplasma hyorhinis 豬鼻支原體 |
豬 |
是 |
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4 |
Mycoplasma orale 口腔支原體 |
人 |
是 |
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5 |
Mycoplasma fermentans 發酵支原體 |
人 |
是 |
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6 |
Mycoplasma hominis* 人型支原體 |
人 |
是 |
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7 |
mycoplasma pneumoniae 肺炎支原體 |
人 |
\ |
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8 |
Mycoplasma salivarium 唾液支原體 |
人 |
\ |
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9 |
Mycoplasma bovis* 牛支原體 |
牛 |
\ |
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10 |
Mycoplasma gallisepticum 雞毒支原體 |
禽類 |
\ |
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11 |
Mycoplasma synoviae 滑液囊支原體 |
禽類 |
\ |
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12 |
Spiroplasma citri 螺原體 |
植物 |
\ |
支原體污染方式和影響
污染的方式
支原體一般通過黏附在宿主上皮細胞表面，從而成為人類、動物和植物的寄生物，通過攝取宿主細胞的膽固醇等營養物質和/或代謝產生的毒素、過氧化氫等有毒物質危害人類和動植物，給細胞制劑和科研工作帶來負面影響。
污染的影響
保守估計常規細胞培養中支原體污染率為15~35%，支原體污染會對細胞內代謝或生化合成過程造成影響，雖不會明顯表現為造成細胞死亡，但卻會嚴重干擾實驗結果的可信度。
圖4 支原體污染的危害
支原體污染，從預防到清除的關鍵策略 01
預防先行
切斷污染源頭
§
嚴格檢測新引入細胞：所有新細胞株或原代分離細胞需通過支原體檢測（如qPCR或LAMP法），確保陰性后方可進入培養體系。
§
規范實驗操作：穿戴專用防護裝備，定期消毒超凈臺、移液器等設備，避免交叉污染。
§
環境管控：細胞房每周紫外線消毒，每月全面清潔并配合支原體預防試劑擦拭死角，維持無菌環境。
02
精準清除
高效去除污染
支原體去除試劑-MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×）40607ES通過靶向支原體DNA快速起效，3天即可顯著改善污染。其低毒性設計不損傷宿主細胞，且操作簡便，僅需加入培養基孵育，廣譜覆蓋95%以上常見支原體類型（如豬鼻支原體、口腔支原體等）。產品特點如下：
§
去除效果顯著
§
支原體污染的細胞中，加入翌圣MycAway™ 支原體去除試劑（1000×），連續培養1周后，培養基顏色明顯緩解（支原體污染的細胞，培養基約1天就會變黃，）顯微鏡觀察細胞狀態，結果顯示細胞狀態明顯改善，細胞倍增時間恢復。
圖5.支原體去除前后細胞狀態比較
§
毒性低
§
針對無支原體污染的細胞，同時使用MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑及PBS處理細胞，24h后，分別使用CCK-8和細胞計數的方式對細胞活力和增殖進行檢測，結果顯示，MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑對細胞生長無顯著抑制作用，毒性低。
圖6.MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑細胞毒性測試結果
03
翌圣生物
支原體防控的全周期保障
為了構建支原體污染的全周期防控體系，翌圣生物科技以創新技術為核心，開發了覆蓋“檢測-清除-預防”三大維度的完整產品矩陣，為實驗室提供一站式解決方案：
§
精準檢測：支原體qPCR檢測試劑盒、LAMP等溫擴增試劑盒等，支持快速篩查與藥典級檢測，靈敏度達10 CFU/mL，滿足細胞治療產品快速放行需求。
§
靶向清除：MycAway™支原體去除試劑（細胞用）及環境專用消殺試劑，廣譜覆蓋95%以上污染支原體，3天高效起效，兼顧細胞安全性與操作便捷性。
§
長效防護：支原體預防試劑結合標準化操作流程，從新細胞準入、實驗環境管控到設備定期消殺，多節點阻斷污染傳播鏈。
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產品清單
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產品應用 |
產品名稱 |
貨號 |
規格 |
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支原體去除 |
MycAway™Treatment(1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent(支原體去除試劑) |
40607ES |
100 μL/ 1mL / 5×1mL |
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支原體預防 |
40605ES |
500mL / 2×500mL / 10×500mL |
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40608ES |
1mL / 5×1mL |
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MycGuard™-1 Solution(100×),for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細胞培養箱水盤1號消毒衛士(支原體污染預防) |
40609ES |
100 mL |
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MycGuard™-2 Solution(500×),for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴鍋2號消毒衛士(支原體污染預防) |
40610ES |
100 mL |
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支原體檢測 （一步法快檢） |
MycAway™Plus-Color One - Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 |
40612ES |
25T / 100T |
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支原體檢測 （PCR） |
40601ES |
10 assays/20 assays |
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支原體檢測（qPCR） |
40618ES |
25T / 100T |
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MycAway® Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit(2G) 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法）(2G) |
40619ES |
25T / 100T |