鈣離子熒光探針這幾個問題你真的了解嗎-自主發布-資訊-生物在線

鈣離子熒光探針這幾個問題你真的了解嗎

作者:西安百螢生物科技有限公司 2020-04-09T13:08 (訪問量:12241)

自從Fluo-3、Fluo-4問世以來,鈣離子的檢測便活躍在大量

實驗研究之中,隨著實驗的需求增加,鈣離子檢測探針也一次又一次的研

發出熒光強度更好、背景更低的一系列物美價廉的產品。市場常見的鈣離子

檢測試劑:Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-4、Fluo-8、cal-520Calb

ryte-520等。由于目前市場上鈣離子檢測試劑的五花八門,有些同學就有些

慌了,到底哪個試劑才是*適合我實驗的選擇呢?請跟著百螢一起看看吧!



  • 根據熒光顏色、熒光強度、背景這些會影響實驗過程中的觀察、
  • 操作的因素來選擇更適合自己實驗的探針。
  • 根據自己實驗室現有儀器來選擇適合自己實驗的探針。

綠色熒光 深紅色熒光 紅色熒光
Fluo-3Cal-630Rhod-2
Fluo-4 Calbryte 630(不需要丙磺舒)Rhod-4
Fluo-8
Cal-590
Cal-520
Calbryte 590(不需要丙磺舒)
Calbryte 520(不需要丙磺舒)


適用于流式適用于成像
Indo-1Fura-2

Fura-8(Fura-2升級版,S/N更高)
Cal Red R525/650 AM(相比Fura-2與Indo-1,它非紫外激發,細胞損傷小)

1.丙磺舒(probenecid)被報道會影響鈣離子通道,比如干擾環核苷酸門控通道,有沒有可

以不用該試劑的鈣離子探針?



回答:

丙磺舒(probenecid),是一種陽離子轉運體抑制劑,用來降低探針進入胞內后被排除的幾率,以提

高胞內信號。常見的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要丙磺舒,否則信號會很低。您可以選擇Calbr

yte系列,該系列無需丙磺舒(probenecid)仍會有很好的信號,降低干擾,是不含丙磺舒(proben

ecid)產品的*佳選擇。

圖示:在存在丙磺舒(左)和不存在(右)的情況下進行Ca2+檢測測定,并使用Ex / Em = 540/590

的FlexStation3測量了截止波長為570 nm的響應。


2.沒有動態讀數功能或者沒有自加樣功能的酶標儀還能做鈣流檢測嗎?



回答:

可以。鈣流檢測的儀器常見的有FlexStation, FLIPR等,可以連續讀數并帶有自加樣系統,這樣就

以在秒的時間范圍內捕捉到更完

整的鈣離子濃度變化。但如果實驗室實在用不到這樣的機器,可以考慮Cell Meter 鈣檢測免洗和免

磺舒檢測試劑盒 (Cat# 36312)

,使用普通的底讀酶標儀就可以了。該試劑盒使用了Fluo-8E AM探針,一旦與鈣離子結合,信號增>

100倍,能夠使信號維持1-2min左

右,給我們自己手動加樣爭取時間。


3.流式檢測鈣離子因為要取下管子加刺激劑,容易錯過*高峰,有沒有辦法?



回答:

我們有流式檢測鈣離子試劑盒,Cat#36310,Cell Meter 鈣測定流式細胞分析試劑盒,也可以選擇

Fluo-8H AM探針,因Kd比較小,

可以使信號保留的時間久一些。


4.有檢測植物細胞的鈣離子探針嗎?



回答:

有的。常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都適用于植物細胞,Fluo-4*常

用,若要獲得更好的信噪比,推薦

其升級版本 Calbryte 520 AM。


5.內質網(ER)或者線粒體內的鈣離子濃度變化,分別使用什么探針?



回答:

ER鈣離子檢測可使用Kd 較高的Rhod-5N, AM (Cat# 21070). 線粒體鈣離子檢測可使用 Rhod-2?

AM (Cat# 21064)。Rhod-2 在低

濃度時特異識別線粒體。


6.血液等體液的里的鈣離子濃度用什么檢測方法?



回答:

人體血液里鈣離子的濃度大約在19 -10.5 mg/dL范圍內。血液里鈣離子濃度過低或者過高可引起低

鈣血癥和高鈣血癥 。 Amplite

熒光法鈣離子定量試劑盒(Cat#36360)可用于定量體液的鈣離子濃度,可使用96孔或者384孔板經

酶標儀獨取數值。不需樣本分離

直接檢測,30min可完成,*低檢測0.03mM的鈣離子。


7.熒光探針的AM、Dextran葡聚糖形式有什么區別?



回答:

AM 形式通過孵育即可進入細胞內,簡便。若檢測孵育時間久容易發生區室化,比如鉆進了內質網

等亞器官內。 Dextran*大的優勢

就是降低了區室化作用,但是需要介入方式進入細胞內,比如microinject等。


8.我們需要高通量檢測,選擇什么產品?



品牌產品名稱貨號
AATCell Meter 鈣檢測免洗和免丙磺舒檢測試劑盒Cat#36312
AATScreen Quest 免洗Fluo-8鈣檢測試劑盒Cat#36315
AATScreen Quest 免洗Fura-2鈣檢測試劑盒Cat#36320
AATScreen Quest 免洗Fluo-4鈣檢測試劑盒Cat#36325
AATScreen Quest Calbryte 590 免丙磺舒和免洗鈣檢測試劑盒Cat#36201
AATCell Meter 鈣檢測免洗和免丙磺舒檢測試劑盒Cat#36312
AATScreen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗鈣檢測試劑盒Cat#36318

鈣離子熒光探針選擇建議:

單波長熒光探針 (根據熒光強度越強,背景越低依次排列)


圖示: CHO-K1細胞中內源性P2Y受體對ATP的反應。 將CHO-K1細胞以每孔100μL每孔40,000個細胞接種過夜,在96孔黑色壁/透

明底板中。將含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte 520AM加入孔中,并將細胞在37℃下孵育45分鐘。 用200μLH

HBS替換染料加載培養基,加入50μL50μMATP,并使用FITC通道用熒光顯微鏡(Keyence)成像。

雙波長比率熒光探針


常見問題解答

回答:下列產品免洗,無需去除培養基,加入染料孵育,直接加刺激劑即可檢測。適用于高通量。

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