自從Fluo-3、Fluo-4問世以來,鈣離子的檢測便活躍在大量的
實驗研究之中,隨著實驗的需求增加,鈣離子檢測探針也一次又一次的研
發出熒光強度更好、背景更低的一系列物美價廉的產品。市場常見的鈣離子
檢測試劑:Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-4、Fluo-8、cal-520、Calb
ryte-520等。由于目前市場上鈣離子檢測試劑的五花八門,有些同學就有些
慌了,到底哪個試劑才是*適合我實驗的選擇呢?請跟著百螢一起看看吧!
- 根據熒光顏色、熒光強度、背景這些會影響實驗過程中的觀察、
- 操作的因素來選擇更適合自己實驗的探針。
- 根據自己實驗室現有儀器來選擇適合自己實驗的探針。
| 綠色熒光 | 深紅色熒光 | 紅色熒光 |
| Fluo-3 | Cal-630 | Rhod-2 |
| Fluo-4 | Calbryte 630(不需要丙磺舒) | Rhod-4 |
| Fluo-8 | Cal-590 | |
| Cal-520 | Calbryte 590(不需要丙磺舒) | |
| Calbryte 520(不需要丙磺舒) |
| 適用于流式 | 適用于成像 |
| Indo-1 | Fura-2 |
| Fura-8(Fura-2升級版,S/N更高) | |
| Cal Red R525/650 AM(相比Fura-2與Indo-1,它非紫外激發,細胞損傷小) | |
1.丙磺舒(probenecid)被報道會影響鈣離子通道,比如干擾環核苷酸門控通道,有沒有可 以不用該試劑的鈣離子探針? 回答: 丙磺舒(probenecid),是一種陽離子轉運體抑制劑,用來降低探針進入胞內后被排除的幾率,以提 高胞內信號。常見的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要丙磺舒,否則信號會很低。您可以選擇Calbr yte系列,該系列無需丙磺舒(probenecid)仍會有很好的信號,降低干擾,是不含丙磺舒(proben ecid)產品的*佳選擇。 ![]() 圖示:在存在丙磺舒(左)和不存在(右)的情況下進行Ca2+檢測測定,并使用Ex / Em = 540/590 的FlexStation3測量了截止波長為570 nm的響應。 |
2.沒有動態讀數功能或者沒有自加樣功能的酶標儀還能做鈣流檢測嗎? 回答: 可以。鈣流檢測的儀器常見的有FlexStation, FLIPR等,可以連續讀數并帶有自加樣系統,這樣就可 以在秒的時間范圍內捕捉到更完 整的鈣離子濃度變化。但如果實驗室實在用不到這樣的機器,可以考慮Cell Meter 鈣檢測免洗和免 丙磺舒檢測試劑盒 (Cat# 36312) ,使用普通的底讀酶標儀就可以了。該試劑盒使用了Fluo-8E AM探針,一旦與鈣離子結合,信號增> 100倍,能夠使信號維持1-2min左 右,給我們自己手動加樣爭取時間。 |
3.流式檢測鈣離子因為要取下管子加刺激劑,容易錯過*高峰,有沒有辦法? 回答: 我們有流式檢測鈣離子試劑盒,Cat#36310,Cell Meter 鈣測定流式細胞分析試劑盒,也可以選擇 Fluo-8H AM探針,因Kd比較小, 可以使信號保留的時間久一些。 |
4.有檢測植物細胞的鈣離子探針嗎? 回答: 有的。常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都適用于植物細胞,Fluo-4*常 用,若要獲得更好的信噪比,推薦 其升級版本 Calbryte 520 AM。 |
5.內質網(ER)或者線粒體內的鈣離子濃度變化,分別使用什么探針? 回答: ER鈣離子檢測可使用Kd 較高的Rhod-5N, AM (Cat# 21070). 線粒體鈣離子檢測可使用 Rhod-2? AM (Cat# 21064)。Rhod-2 在低 濃度時特異識別線粒體。 |
6.血液等體液的里的鈣離子濃度用什么檢測方法? 回答: 人體血液里鈣離子的濃度大約在19 -10.5 mg/dL范圍內。血液里鈣離子濃度過低或者過高可引起低 鈣血癥和高鈣血癥 。 Amplite 熒光法鈣離子定量試劑盒(Cat#36360)可用于定量體液的鈣離子濃度,可使用96孔或者384孔板經 酶標儀獨取數值。不需樣本分離 直接檢測,30min可完成,*低檢測0.03mM的鈣離子。 |
7.熒光探針的AM、Dextran葡聚糖形式有什么區別? 回答: AM 形式通過孵育即可進入細胞內,簡便。若檢測孵育時間久容易發生區室化,比如鉆進了內質網 等亞器官內。 Dextran*大的優勢 就是降低了區室化作用,但是需要介入方式進入細胞內,比如microinject等。 |
8.我們需要高通量檢測,選擇什么產品? |
| 品牌 | 產品名稱 | 貨號 |
| AAT | Cell Meter 鈣檢測免洗和免丙磺舒檢測試劑盒 | Cat#36312 |
| AAT | Screen Quest 免洗Fluo-8鈣檢測試劑盒 | Cat#36315 |
| AAT | Screen Quest 免洗Fura-2鈣檢測試劑盒 | Cat#36320 |
| AAT | Screen Quest 免洗Fluo-4鈣檢測試劑盒 | Cat#36325 |
| AAT | Screen Quest Calbryte 590 免丙磺舒和免洗鈣檢測試劑盒 | Cat#36201 |
| AAT | Cell Meter 鈣檢測免洗和免丙磺舒檢測試劑盒 | Cat#36312 |
| AAT | Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗鈣檢測試劑盒 | Cat#36318 |
鈣離子熒光探針選擇建議:
單波長熒光探針 (根據熒光強度越強,背景越低依次排列)

圖示: CHO-K1細胞中內源性P2Y受體對ATP的反應。 將CHO-K1細胞以每孔100μL每孔40,000個細胞接種過夜,在96孔黑色壁/透
明底板中。將含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte 520AM加入孔中,并將細胞在37℃下孵育45分鐘。 用200μLH
HBS替換染料加載培養基,加入50μL50μMATP,并使用FITC通道用熒光顯微鏡(Keyence)成像。
雙波長比率熒光探針
常見問題解答
回答:下列產品免洗,無需去除培養基,加入染料孵育,直接加刺激劑即可檢測。適用于高通量。

