免疫組化實(shí)驗(yàn)其實(shí)也不難-技術(shù)前沿-資訊-生物在線

免疫組化實(shí)驗(yàn)其實(shí)也不難

作者：北京義翹神州科技有限公司 2019-10-30T08:39 (訪問量:9769)

新的學(xué)期開始了，我們又要開始面對繁瑣的免疫組化（IHC）實(shí)驗(yàn)了。IHC 實(shí)驗(yàn)從操作上來講并不算難，但是由于操作步驟較多，因此造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想的因素較多，曾有人總結(jié)出「九九八十一難」，現(xiàn)在我們就 IHC 操作常遇到的一些問題及其解決方法進(jìn)行匯總，希望能解決你的 IHC 問題。

1. 抗體濃度過高

一抗?jié)舛冗^高是造成切片染色深常見的原因之一。解決辦法是在每次使用新抗體前對其工作濃度進(jìn)行測試，使每一抗體個(gè)體化，找到適合自己實(shí)驗(yàn)室的理想工作濃度，包括即用型的抗體也同樣需要進(jìn)行測試，不能只簡單的按照說明書進(jìn)行染色。

2. 抗體孵育時(shí)間過長或溫度較高

為了避免這種情況出現(xiàn)，相關(guān)人員應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，最好隨身佩帶報(bào)時(shí)表或報(bào)時(shí)鐘，及時(shí)提醒，避免因遺忘而造成時(shí)間延長。現(xiàn)在流行的二步法敏感性很高，要求一抗孵育的時(shí)間不是傳統(tǒng)的 1 小時(shí)，而是 30 分鐘，因此，要根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整。

3. DAB 變質(zhì)和顯色時(shí)間太長

DAB 最好現(xiàn)用現(xiàn)配，如有沉渣，應(yīng)進(jìn)行過濾后再使用。配制好的 DAB 不應(yīng)存放時(shí)間太長，因?yàn)樵跊]有酶的情況下，過氧化氫也會游離出氧原子與 DAB 產(chǎn)生反應(yīng)，從而降低 DAB 的效力；像未用完的 DAB 存放在冰箱里，需要的時(shí)候再取用的這種行為也是不可取的。DAB 的顯色最好在顯微鏡下監(jiān)控，待達(dá)到理想的染色程度時(shí)，應(yīng)立即終止反應(yīng)。

當(dāng)由于染色片太多或使用染色機(jī)，導(dǎo)致無法及時(shí)進(jìn)行終止操作時(shí)，也應(yīng)該盡量對新的，或使用頻率不高的抗體，進(jìn)行顯色時(shí)的監(jiān)控，避免顯色時(shí)間過長。

4. 組織變干

修復(fù)液溢出后未及時(shí)補(bǔ)充液體、染色切片太多、動作太慢、忘記滴液、滴液流失等都是造成組織變干的原因。這就要求相關(guān)人員在操作過程中要做到仔細(xì)認(rèn)真，并采用 DAKO 筆或 PAP Pen 在組織周圍畫圈，達(dá)到有效的避免液體流失，提高操作速度的效果。

5. 切片在緩沖液或修復(fù)液中浸泡時(shí)間大于 24 小時(shí)

具體原理不清楚，但現(xiàn)象確實(shí)存在。有的實(shí)驗(yàn)室喜歡前一天將切片脫蠟至修復(fù)，第二天加抗體進(jìn)行免疫組化染色，如果將裝有切片和修復(fù)液的容器放在 4oC 冰箱過夜，對結(jié)果無明顯影響；如果放在室溫，特別是炎熱的夏天，則會出現(xiàn)背景著色。因此，不可存放時(shí)間太長。

6. 一抗變質(zhì)、質(zhì)量差的多克隆抗體

由于過期的抗體會導(dǎo)致切片不顯色或者背景著色，所以應(yīng)當(dāng)注意一抗的有效期。

用新買抗體時(shí)最好設(shè)立陽性對照和用使用過的抗體作比較。

7. 忘記血清封閉

在免疫組化中使用封閉血清，可以消除非特異性染色，提高目的蛋白的準(zhǔn)確性和降低背景。封閉血清一般選擇和二抗來源相同的，因此常用山羊血清。有時(shí)也會使用小牛血清、BSA、羊血清等，但不可與一抗來源相同。

8. 操作過程中脫片

（1）可能是黏附載玻片質(zhì)量的問題，建議嘗試更換載玻片。

（2）組織切的不好，可能是切片機(jī)刀片較鈍造成切片切的厚、不均勻，或者是切片機(jī)操作者手法不熟練等。

（3）可能是組織的問題，比如癌癥組織有壞死情況時(shí)，也容易造成脫片。

（4）烘烤結(jié)果不理想，可能是烘烤時(shí)間較短或溫度不夠等。

（5）操作時(shí)甩動幅度過猛，有脫片嫌疑的切片最好不甩或輕輕甩，可用衛(wèi)生紙從邊緣上慢慢吸水。

（6）修復(fù)過程出現(xiàn)問題，比如在抗原修復(fù)時(shí)，高壓時(shí)間過長，或者放進(jìn) 100 度修復(fù)液時(shí)不夠平穩(wěn)，也容易出現(xiàn)脫片的情況。此外，用 EDTA 修復(fù)比檸檬酸更容易脫片。

（7）一旦見到有組織漂起來，在操作時(shí)就要更加謹(jǐn)慎，使用 PBS 的時(shí)候盡量泡，不要沖。

北京義翹神州科技有限公司商家主頁

地址：北京亦莊東區(qū)科創(chuàng)十街18號院9號樓306室

聯(lián)系人：客服部

電話： 400-890-9989

傳真： 010-50911666

Email：marketing@sinobiological.cn

女人与狗锁死了视频大全|霍金死亡过程恐怖视频|无节社团简谱季免费观看|六间房直播大厅|中文字幕欧美另类精品|久久人人玩人妻潮喷内射人人|亚洲国产一区二区三区在线观看