肝小葉是肝結構和功能的基本單位，肝小葉以中央靜脈為中心，肝板、肝血竇圍繞中央靜脈呈輻射狀分布。肝臟的細胞組成主要包括肝實質細胞（即肝細胞）和非實質細胞（貯脂細胞（Ito細胞），血竇內皮細胞，Kupffer細胞，陷窩細胞，巨噬細胞等）。
人肝癌組織單細胞懸液制備
實驗目的：
將肝癌樣本分離，制備單細胞懸液，用于后續單細胞測序。
實驗準備：
樣本接收，拍照留存，超凈臺紫外消毒、備好冰盒冰板，準備好相應酶液。
【酶液】：
2mg/ml collagenase IV
1mg/ml collagenase I
0.02 mg/ml DNase I
30 U/ml hyaluronidase
5% FBS
0.6% bovine serum albumin (BSA)
HBSS
實驗步驟：
1. 將組織倒入培養皿中，加入清洗液，搖晃清洗后棄去，共清洗三次；
2. 完全棄去清洗液后，加入配置好的酶液，使用干凈的剪刀將組織完全剪碎；
3. 待組織完全剪碎后，用移液器將每組剪碎的組織移到 15ml 離心管內；
4. 將裝有組織的離心管放置在 37℃搖床上消化 30min，30min 后吸上清過濾，加入新酶再消化 30min；
5. 待消化結束，將各組消化液轉移至 50ml 離心管，補清洗液至 40ml，將其通過 40μm 濾器轉移至新 50ml 離心管，300×g 離心 5min；
6. 棄去上清，加入紅細胞裂解液 1ml 重懸裂解紅細胞，裂解時間 3min；
7. 加入 10ml 清洗液終止裂解并清洗細胞，300×g 離心 5min 后清洗液重懸；
8. 加入新的清洗液，300×g離心 5min 清洗細胞兩次后對懸液進行質檢。
小鼠肝臟組織單細胞懸液制備
實驗目的：
將小鼠肝臟樣本分離，制備單細胞懸液，用于后續單細胞測序。
實驗準備：
樣本接收，拍照留存，超凈臺紫外消毒、備好冰盒冰板，準備好相應酶液。
【酶液】：
1mg/ml collagenase IV
0.5mg/ml collagenase I
0.02 mg/ml DNase I
30U/ml hyaluronidase
0.6% bovine serum albumin (BSA)
5% FBS
HBSS
實驗步驟：
1. 將組織倒入培養皿中，加入清洗液，搖晃清洗后棄去，共清洗三次；
2. 加入清洗液，300×g，5min 離心清洗；
3. 棄去清洗液后，加入適量消化液，混勻消化；
4. 取20uL消化懸液進行臺盼藍染色鏡檢，觀察細胞，免疫細胞占比較多，肝實質細胞剪碎后發現部分細胞死亡處理后占比較少；
5. 用封口膜將離心管封好，將樣本放置在37oC搖床消化20min；
6. 20min后，還未消化完全，吹打混勻后繼續消化5min；
7. 5min后觀察消化效果，發現組織基本消化。
8. 將消化液通過100μm，40um濾網轉移至50mL離心管內， 300×g 離心5min；
9. 棄去上層液體，加入2mL紅細胞裂解液輕柔吹散細胞，靜置3min；
10.加入清洗液至10ml終止裂紅，300×g 離心5min；
11. 棄去上清，加入適量清洗液重懸混勻，分別取20ul進行AO/PI計數及臺盼藍鏡檢。
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部分實驗結果展示
樣本：人肝癌組織
細胞活率：91.2%
活細胞濃度：3.26E+05/ml
結團率：9.7%
樣本：小鼠肝臟組織
細胞活率：93.16%
活細胞濃度：9.55E+05/ml
結團率：3.54%