胱氨酸蛋白酶在細胞凋亡或程序性細胞死亡中是必需的，在發(fā)育和成年生活的大多數(shù)其他階段，并且因其在細胞中的作用而被稱為“劊子手”蛋白質。免疫系統(tǒng)中也需要一些半胱天冬酶用于淋巴細胞的成熟。細胞凋亡失敗是腫瘤發(fā)展和自身免疫疾病的主要原因之一。
百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質的胱天蛋白酶Caspase 3/7系列產品
試驗方案
操作方法?
以下說明書僅提供指南，實際應根據(jù)您的具體需求進行修改。
1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase測定
1.1在DMSO中制備10mM儲備溶液。
1.2制備2X半胱天冬酶底物（50μM）測定溶液，如下所示：
50 uL基質原液
100L DTT（1M）
400L EDTA（100 mM）
10mL Tris緩沖液（20mM），pH = 7.4
1.3將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟1.2）混合，并在室溫下孵育溶液至少1小時。
1.4使用熒光酶標儀檢測熒光，或使用吸光度酶標儀檢測吸光度。
2.細胞Caspase檢測使用細胞滲透FMK半胱天冬酶探針
2.1在DMSO中制備2-5mM儲備溶液。
2.2根據(jù)需要對細胞進行處理。
2.3通過用20mM Hepes緩沖液（HHBS）稀釋Hanks中的DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X可滲透的半胱天冬酶底物（20μM）測定溶液。
2.4用2X半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟2.3）混合等體積的處理細胞，并將細胞在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育至少1小時。
2.5用HHBS洗滌細胞至少一次。
2.6用流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監(jiān)測熒光強度。
3.細胞Caspase檢測使用細胞滲透性FMK Caspase探針（僅適用于＃13470-13476）
3.1通過向小瓶中加入50μLDMSO制備250X儲備溶液。
3.2根據(jù)需要對細胞進行處理。
3.3將250 X DMSO儲備溶液（來自步驟3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL細胞）添加到細胞溶液中，并將細胞在37°C，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育1 小時。
3.4用HHBS洗滌細胞至少一次。
3.5用流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監(jiān)測熒光強度。
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